Croissance et stabilité génétique des vitroplants de prunier Ferlenain Plumina R après cryoconservation de méristèmes

by Bertrand Helliot

Doctoral thesis in Biologie et physiologie cellulaires

Under the supervision of MARIE THERESE DE BOUCAUD.

defended on 1998

in Bordeaux 1 .


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  • Abstract

    La conservation des ressources genetiques du genre prunus represente aujourd'hui un enjeu important pour la sauvegarde de la biodiversite de ce genre. Les techniques traditionnelles de conservation presentent un certain nombre d'inconvenients qui peuvent etre pallies par l'utilisation complementaire de la cryoconservation dans l'azote liquide (196\c). Dans une premiere partie, l'etude de l'impact de differents facteurs sur la reprise de croissance nous a permis de developper un protocole de congelation en deux etapes dans les conditions suivantes : acclimatation au froid des vitroplants 24 heures a 4\c, preculture des meristemes 24 heures a 4\c sur un milieu de preculture contenant 5% de dmso et 20% de proline ; cryoprotection des meristemes de 45 minutes a 4\c dans une solution cryoprotectrice pvs-2 modifiee et contenant 5% de proline ; congelation a la vitesse de 5\c/min jusqu'a 40\c, stockage dans l'azote liquide et decongelation rapide dans un bain-marie a +40\c. Ce protocole nous a permis d'obtenir la regeneration de 50 a 60% des meristemes congeles. Dans une deuxieme partie, l'etude de la stabilite des plants issus de la congelation et de differents plants temoins a ete entreprise afin de determiner l'impact, d'une part, des variations de temperatures engendrees par les cycles de congelation-decongelation et d'autre part, des differents cryoprotecteurs. Des techniques de biologie moleculaire (rapd et aflp) ont ete principalement utilisees pour detecter du polymorphisme parmi les vitroplants congeles ou non. Nous avons observe une augmentation significative de la frequence de rearrangement de l'adn de certains vitroplants imputable a la cryoconservation.

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  • Details : 130 p

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