Association et rétention d'une protéine enzymatique avec des films de type Langmuir-Blodgett : interactions lipide - protéine entre la luciférase de luciole et des films d'acides gras, de phospholipides et de glycolipides

Association and retention of an enzymatic protein with langmuir-blodgett films lipid - protein interactions between the firefly luciferase and fatty acid, phospholipid and glycolipid langmuir-blodgett films

• Auteur / Autrice : Lucile Marron-Brignone
• Direction : Pierre Coulet
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences. Biochimie
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Lyon 1
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Pierre Coulet

Mots clés

Mots clés contrôlés

Lipoprotéines

Bioluminescence

Langmuir-Blodgett, Couches de

Glycolipides

Phospholipides

Résumé

Ce travail concerne l'association d'une enzyme selon differents procedes (adsorption ou inclusion) avec des films langmuir-blodgett (lb) construits avec differentes molecules amphiphiles (acide docosanoique, dppa/dppc, glycolipide de synthese le (3,6,9,12-tetraoxa-10-undecyloxymethyl) -tricosyl 2 -acetamido- 2 -desoxy--d-glucopyranoside). L'influence des films lipidiques a ete etudiee sur les proprietes de l'enzyme. La luciferase de luciole, enzyme de bioluminescence, est adsorbee sur les surfaces hydrophile ou hydrophobe des films. Associee a ces environnements lipidiques, la luciferase est active mais son comportement cinetique est different de celui qu'elle a en solution aqueuse. Ceci nous a permis de montrer l'existence de deux populations d'enzyme adsorbees, une population specifiquement liee et une population non specifiquement liee. La luciferase s'adsorbe preferentiellement sur les surfaces hydrophiles, mais quelle que soit la nature de cette surface, on observe une mauvaise retention de la proteine. Pour inserer la luciferase, des vesicules glycolipidiques sont utilisees comme vecteur de la proteine a l'interface air / eau afin de former un film interfacial proteo-glycolipidique transferable sur un support solide. Ce procede permet d'integrer seulement la population de proteine specifique au sein des films avec une retention optimale. Une etude complementaire a ete realisee sur le comportement interfacial de plusieurs glycolipides de synthese. Selon la balance amphipathique de ces molecules, les monocouches existent dans un etat expanse ou condense ; dans ce dernier cas la structure du glycolipide peut induire un phenomene de sursaturation au moment de la phase de transition. Les groupes saccharidiques etant tres hydrates, un seul glycolipide a pu etre transfere sur une surface particuliere constituee par des groupes carboxyliques ; c'est celui qui a ete utilise pour l'etude de l'association de la luciferase.