Contribution à l'analyse des antigènes de surface de Clostridium tyrobutyricum : étude de l'association entre la flagelline et des glucides

by Laurent Bedouet

Doctoral thesis in Microbiologie fondamentale et appliquée

Under the supervision of Roger Malcoste.

defended on 1997

in Brest .

  • Alternative Title

    Contribution to the analysis of the surface-exposed antigens of Clostridium tyrobutyricum : study of the interaction between flagellin and carbohydrate


  • Abstract not available


  • Abstract

    Un des problèmes majeurs qui survient au moment de l'affinage et du stockage des fromages à pâte pressée cuite (type emmental) est le défaut butyrique. L'agent responsable est Clostridium tyrobutyricum, une bactérie sporulée gram positif. Afin de dénombrer les spores de C. Tyrobutyricum présentes dans le lait des anticorps monoclonaux (ACM) ont été produits au laboratoire contre C. Tyrobutyricum ATCC 25755. L'ACM 21e7-b12 est utilise dans un test immuno-enzymatique après filtration du lait sur membrane ou il permet de dénombrer les colonies de C. Tyrobutyricum, C. Butyricum et C. Sporogenes. Nous montrons après purification des flagelles de C. Tyrobutyricum ATCC 25755, que l'antigène reconnu par l'ACM 21e7-b12 est la flagelline. Des propriétés biochimiques de la flagelline ont ensuite été déterminées : poids moléculaire apparent (46 kda), point isoélectrique apparent (3,6), composition en acides amines, composition partielle en monosaccharides, séquence nh#2#- terminale et séquence d'un peptide interne. L'eprom flagellaire reconnu ressemblerait a une séquence de maltopentaose (5 résidus de glucose relies par des liaisons osidiques #1##4). D'autres composants (telle la n-acetyl-glucosamine) participeraient également à son organisation. De plus, pour être reconnu par l'ACM 21e7-b12, le déterminant antigénique devrait se présenter sous une forme linéaire. Des deglycosylations par voie chimique (action de l'acide trifluoromethanesulfonique et réactions d'élimination- en condition non réductrice) indiquent que la flagelline de C. Tyrobutyricum ATCC 25755 est une glycoproteine. Des oligosaccharides seraient lies a la flagelline par l'intermédiaire d'acides amines serine et/ou thréonine. La glycosylation de la flagelline semble complexe car la deglycosylation par la réaction d'élimination- n'est que partielle. Des oligosaccharides, différents de ceux portant l'epitope reconnu par l'ACM 21e7-b12, seraient lies à la flagelline par des résidus asparagine et/ou tyrosine. D'autre part, l'hétérogénéité du poids moléculaire de la flagelline mise en évidence après egpa sds et immunoempreinte, indiquerait soit l'existence de plusieurs sites de glycosylation où soit l'addition a la flagelline d'oligosaccharides de longueur variable.

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Informations

  • Details : 1 vol. (222 f.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 211-222

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