Production de sondes destinées à l'étude d'une lectine endogène du système nerveux de mammifères : application à l'expression de la galectine-1 au sein du bulbe olfactif de rat

Production of probes to study an endogenous lectin of mammals nervous system. Application to the expression of galectin-one in rat olfactory bulb

• Auteur / Autrice : Jean-Denis Cornillot
• Direction : Dominique Bladier
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : sciences biologiques fondamentales et appliquées, psychologie
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Paris 13

Mots clés

Mots clés contrôlés

Anticorps monoclonaux

Lectines

Bulbe olfactif

Résumé

Le but de ce travail a été de développer et de valider des outils permettant la détection spécifique de la galectine-1, membre de l'une des familles de lectines endogènes de vertébrés, les galectines. La culture d'hybridomes murins a permis l'obtention de deux lignées cellulaires monoclonales secrétant de manière stable des anticorps spécifiques de la lectine humaine. Cette spécificité a été obtenue par sélection, durant toutes les étapes de développement des lignées, d'anticorps reconnaissant la galectine-1 mais n'interagissant pas avec la galectine-3. La purification et la caractérisation de ces anticorps a contribué à la mise au point de différents tests de détection de la galectine-1. Par compétition en phase hétérogène il a été possible de déterminer que les épitropes reconnus par ces deux anticorps sont identiques ou suffisamment proches pour inhiber leur fixation réciproque. Les expériences réalisées montrent que les anticorps, confrontés à différents membres de la famille des galectines (galectine 3 humaine, murine) ou à des extraits protéiques totaux de cerveau humain restent hautement spécifiques de la galectine-1. Parallèlement, des oligodeoxyribonucleotides anti-sens, sélectionnés par comparaison des différentes séquences connues d'acides nucléiques codant pour les galectines, ont été synthétisés, puis couplés à un marqueur radioactif. A l'aide de ces outils, l'étude de l'expression de la galectine-1 lors de différents stades de développement du bulbe olfactif de rat a été entamée. La confrontation des résultats obtenus et les nouvelles données issues de ce champ d'étude en croissance rapide, met l'accent sur la nécessité de développer de tels outils de détection spécifique afin d'appréhender les fonctions physiopathologiques des galectines