Analyse de la diversite genetique des isolats et identification d'antigenes recombinants du parasite hematozoaire babesia canis

Analysis of the genetic diversity among isolates and identification of recombinant antigens from the haematozoan parasite babesia canis

• Auteur / Autrice : THIERRY CITARD
• Direction : Gérard Buttin
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

La diversite genetique de l'espece babesia canis, parasite intra-erythrocytaire du chien, a ete sondee par la technique des empreintes genetiques, en analysant le polymorphisme de longueur des fragments de restriction de l'adn genomique. La sonde ps8, d'une taille de 1,2 kilopaires de bases et qui detecter specifiquement jusqu'a 20 picogrammes d'adn de b. Canis, a permis de reveler une large diversite genetique entre les nombreux isolats parasitaires recoltes en france. De plus, plusieurs sous-populations, selectionnees in vitro a partir d'un isolat unique et presumees clonales, ont pu etre identifiees egalement par leur empreinte genetique. Les resultats ont montre que l'empreinte genetique d'un isolat donne apparait comme la superposition des empreintes genetiques des clones, notamment des clones quantitativement majoritaires dans l'isolat. L'analyse du parasite b. Canis a ete etendue a l'identification et a la caracterisation de plusieurs de ses antigenes. Une banque genomique d'expression a ete criblee avec des serums hyper-immuns, collectes chez des chiens proteges cliniquement contre la babesiose. Cent trente six clones recombinants exprimant des fragments d'antigenes de b. Canis ont ete identifies. L'etude des reactions serologiques croisees a permis de classer quatre vingt dix clones en onze familles et cinq super-familles distinctes, simplifiant ainsi l'analyse. Des antiserums monospecifiques et polyclonaux diriges contre l'antigene recombinant ra7, de 87 kilodaltons, ont ete obtenus chez des souris et un chien. Les anticorps de souris et de chien anti-ra7 reagissent specifiquement, a la fois, avec majoritairement trois proteines parasitaires de 120/115 et 105 kilodaltons, et avec les deux extremites polaires des merozoites, et majoritairement avec l'extremite apicale.