Cgrp (calcitonin gene related peptide) : facteur de croissance et agent chimiotactique au cours de l'embryogenese. application en pathologie humaine dans le psoriasis

Cgrp (calcitonin gene related peptide): growth factor and chemotactic agent during embryogenesis. Application in human pathology in the psoriasis

• Auteur / Autrice : PASCALE GERBAUD LAURENT
• Direction : R. BERTIN
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences médicales
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Paris, EPHE

Résumé

L'objectif de ce travail contribue a rechercher une meilleure comprehension du role biologique du cgrp et de son mecanisme d'action cellulaire. Deux modeles ont ete etudies: le modele privilegie de differenciation in vitro des cellules de teratocarcinome murin un modele de pathologie specifiquement humaine: les fibroblastes des sujets atteints de psoriasis. Le cgrp (calcitonin gene related peptide) dont l'existence et la sequence d'aminoacides ont ete deduites de l'analyse du gene de la calcitonine, apparait comme un peptide exprime preferentiellement au niveau cerebral et a activite vasomotrice. Dans les cellules f9 de teratocarcinome, nous avons revele l'existence d'un systeme autocrine pour ce peptide. La cellule f9 indifferenciee, ayant des proprietes communes avec les cellules du bouton embryonnaire, possede une activite adenylyl cyclase membranaire stimulee 7 a 8 fois par 10#-#7 m de cgrp de poulet et a degre moindre par le cgrp humain. L'arn messager du cgrp, etudie par pcr et northern blot, est fortement exprime dans ces cellules. Ce peptide est egalement retrouve par dosage radioimmunologique en intracellulaire et dans le milieu conditionne par les cellules f9. L'adjonction d'un anticorps anti-cgrp sur la culture cellulaire, induit une diminution de croissance. De plus, dans ces cellules, les differents derives du gene de la calcitonine ont un effet chimiotactique mesure en chambre de boyden. L'activite maximale de ces peptides est observee a 10#-#1#1 m avec par ordre d'efficacite decroissant cgrpp= cts>cgrphcth. La differenciation des cellules f9 en endoderme parietal primitif par adjonction d'acide retinoique, induit une disparition de l'expression du messager et de la detection de ce peptide, concommitante avec une disparition de la simulation de l'activite adenylyl cyclase membranaire. La lignee etablie d'endoderme parietal, pys, ne possede pas de boucle autocrine pour le cgrp. Ainsi, au debut de l'embryogenese ou predominent des actions locales autocrines et paracrines dans l'induction et la modulation de la croissance et differenciation cellulaire, le cgrp pourrait etre un facteur mitogene et chimiotactique ne stimulant la voie de transduction de l'amp cyclique qu'a de fortes concentrations. Nous avons ensuite etudie le role du cgrp au niveau du fibroblaste psoriasique, celule promotrice de certaines anomalies observees au niveau keratinocytaire. En raison du caractere inflammatoire de la maladie, nous avons tout d'abord etudie le statut oxydatif des fibroblastes psoriasiques. Ce dernier est caracterise par une augmentation tres significative de l'expression et de l'activite de la superoxyde dismutase mitochondriale a manganese et a un moindre degre de la superoxyde dismutase cytosolique a cuivre zinc. L'adjonction de cgrp sur des cultures primaires de fibroblastes de sujets normaux et de sujets psoriasiques entraine une diminution tres significative de l'activite de la superoxyde dismutase a manganese, suggerant un role inducteur de ce neuropeptide dans les anomalies oxydatives observees au niveau cutane