La poly(adp-ribose) polymerase : caracterisation de son signal de localisation nucleaire et surproduction d'un mutant dominant-negatif dans des cellules en culture

Poly(adp-ribose) polymerase: characterization of its nuclear localization signal and overproduction of a dominant-negative mutant in cultured cells

• Auteur / Autrice : Valérie Schreiber
• Direction : Josiane Menissier de Murcia
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

La poly(adp-ribose) polymerase (parp) est une enzyme nucleaire impliquee dans la reponse cellulaire aux dommages produits dans l'adn par des agents genotoxiques. Son activite de poly(adp-ribosyl)ation est strictement dependante de la presence d'interruptions dans l'adn. La parp activee modifie des proteines nucleaires acceptrices (ex: histones, topoisomerases) qui voient leur affinite pour l'adn diminuer. Nous avons caracterise le signal de localisation nucleaire (nls) de la parp. Ce nls, bipartite, comporte deux motifs basiques interdependants: 207-krk-x(11)-kkkskk-226. Les lysines 207 et 222 et l'arginine 208 sont des residus cruciaux pour le ciblage de la proteine dans le noyau. Pour comprendre le role de la parp, nous avons etabli des lignees cellulaires dans lesquelles la parp est inhibee par surproduction de son domaine de liaison a l'adn, qui se comporte comme un mutant dominant-negatif. Le traitement de ces lignees cellulaires par des agents genotoxiques entraine un ralentissement de la croissance cellulaire et une accumulation des cellules a l'interphase s/g2 du cycle cellulaire. Dans ces conditions, la survie cellulaire est fortement diminuee et la mort cellulaire par apoptose est declanchee. D'autre part, ces cellules presentent une augmentation du taux d'echange de chromatides surs. Ces resultats suggerent un role potentiel de la parp dans le maintien de l'integrite du genome, en signalant la presence d'interruptions dans l'adn, conduisant a un arret du cycle en phase g2 ou a un suicide cellulaire par apoptose