La cholesterol oxydase : modification chimique et specificite, mecanisme de l'activite isomerase

Cholesterol oxidase: chemical modification and specificity, mechanism of the isomerase activity

• Auteur / Autrice : CLAIRE LOUBAT-HUGEL
• Direction : Jean-François Biellmann
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

La cholesterol oxydase de brevibacterium sterolicum modifiee par le peroxyde d'hydrogene est inactive vis-a-vis du cholesterol solubilise en milieu tampon/surfactants. Des substrats solubles dans le tampon, et le cholesterol en microemulsion restent substrats de l'enzyme modifie. La modification semble etre due a l'oxydation de deux methionines en sulfoxydes, et implique: - perte de l'interaction de l'enzyme avec les micelles mixtes substrat/surfactant - modification de la cinetique de la reconnaissance du substrat dans le site et/ou du relargage du produit dans le milieu. Les etudes de l'activite isomerase des cholesterol oxydases de brevibacterium sterolicum et de nocardia erythropolis, en microemulsion cationique, indiquent: - un transfert de proton par l'enzyme de la position 4 du substrat a la positon 6 du produit, - la possibilite pour l'enol, intermediaire reactionnel, de se dissocier du site de l'enzyme, et d'etre enolise en solution, - des echanges de proton avec le milieu sur la base de l'enzyme qui enolise les substrats. Les vitesses relatives de ces trois processus varient pour une meme source d'enzyme, selon le substrat utilise, et pour un meme substrat, selon l'enzyme utilise. Pour l'enzyme de brevibacterium sterolicum, le transfert de proton est essentiellement intramoleculaire