Etude des bases moleculaires de la phenylcetonurie en france. Expression in vitro de la phenylalanine hydroxylase humaine dans un systeme cellulaire humain

Study of the molecular basis of phenylketonuria in france. In vitro expression of the human phenylalanine hydroxylase in a human cell line

• Auteur / Autrice : DOMINIQUE MELLE
• Direction : Arnold Munnich
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences médicales
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

La phenylcetonurie (pcu) est un deficit autosomique recessive du metabolisme des acides amines qui en l'absence de traitement, donne lieu a des arrierations mentales severes de l'enfant et est due a un deficit important en phenylalanine hydroxylase (pah). Cette maladie se caracterise en france par une grande heterogeneite genotypique et phenotypique. Le but de cette these est une etude des correlations genotype-phenotype de la pcu. Elle comprend une introduction decrivant le systeme d'hydroxylation de la phenylalanine, le gene pah ainsi que les differentes formes cliniques de la maladie. Dans la premiere partie de ce travail, une etude de demographie historique d'une mutation du gene pah precedemment decrite (miv), a ete effectuee. De plus, trois nouvelles mutations dans le gene pah ont ete identifiees, soit par une etude des polymorphismes de l'adn simple brin (mutations a259v, y277d), soit par une analyse systematique des polymorphismes de longueurs de fragments de restriction (mutation s273f). La deuxieme partie du travail decrit la mise au point d'un systeme d'expression transitoire in vitro de la pah humaine dans la lignee cellulaire d'adenocarcinome colique humaine sw613. Un tel systeme est indispensable pour determiner si une mutation correspond a un evenement deletere ou a un polymorphisme. Il a permis d'une part la validation fonctionnelle de trois mutations ponctuelles (l333s, r241h et e390g) et d'autre part la determination des parametres cinetiques de la proteine mutante deltai94. Cette approche pourra etre utilisee pour etudier d'autres mutations du gene pah et permettre ainsi progressivement l'etablissement des correlations genotype-phenotype de la maladie