Etude immunostructurale de clpg, sous unite majeure de l'antigene polymerique cs31a produit par des souches de escherichia coli et utilisation pour l'insertion d'epitopes viraux a des fins vaccinales

• Auteur / Autrice : Marie-Claire Méchin
• Direction : Bernard Joly
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Clermont-Ferrand 2

Résumé

L'antigene polymerique cs31a, produit a la surface de souches de escherichia coli enterotoxinogenes et septicemiques d'origine bovine, a ete utilise comme proteine vecteur d'epitopes heterologues dans le but de developper des vaccins recombinants. Cs31a est constitue d'un grand nombre de sous-unites majeures clpg, associees a des sous-unites mineures. La strategie a consiste a introduire, par genie genetique, dans une region potentiellement permissive de clpg, des epitopes b lineaires du virus de la gastro-enterite transmissible (tgev) du porcelet, choisis pour leur capacite a induire des anticorps neutralisants. Dans la premiere partie de cette these, la technique epitope-scanning a permis d'identifier six regions lineaires immunodominantes sur la sous-unite clpg denaturee. L'une d'entre elles est particulierement accessible aux anticorps sur le polymere cs31a natif et se situe dans la boucle variable v3 (186-221) de clpg. Dans la seconde partie, les epitopes a et c de la proteine s du tgev inseres dans cette region ont permis de demontrer la grande permissivite (25 acides amines heterologues) du site 203 de clpg localise au milieu de la boucle variable v3. Au contraire, les sites 190 a 192, positionnes au debut de la boucle v3 au niveau d'une structure en b-turn, sont faiblement permissifs. Les proteines 326c (epitope c en 203) et 326ac (epitopes a et c en 203), purifiees et denaturees, sont capables d'induire des anticorps specifiques des epitopes heterologues chez des souris immunisees par voie intraperitoneale. Dans la majorite des cas, les antiserums produits reconnaissent le tgev et certains d'entre eux sont neutralisants. L'ensemble de ces resultats demontre les grandes potentialites de la sous-unite clpg et du polymere cs31a comme proteines porteuses d'epitopes heterologues pour le developpement de vaccins recombinants epitopiques