Proprietes amphiphiles et structure des formes moleculaires de l'acetylcholinesterase du cerveau de rat

Amphiphilic properties and structure of the molecular forms of rat brain acetylcholinesterase

• Auteur / Autrice : Christian Andrès
• Direction : A. AKSMAN
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

L'acetylcholinesterase (ache) est une enzyme clef du fonctionnement de la synapse cholinergique car elle hydrolyse rapidement l'acetylcholine. Le present travail a pour but de caracteriser les formes de l'ache du cerveau du rat sur le plan fonctionnel et structurel. Nous avons mis au point une nouvelle methode de separation des isomeres en taille de l'ache, par l'elution d'un gel d'affinite avec un gradient de tetramethylammonium. La fraction soluble dans un tampon salin (ache ss) et la fraction necessitant du detergent pour sa solubilisation (ache sd) ont ete purifiees a homogeneite. L'elimination du detergent entraine une autoagregation et une denaturation. Il est possible de lier les differentes formes a des liposomes artificiels. L'electrophorese de l'ache marquee par du 3-(trifluoromethyl)-3-(m-#1#2#5i)-iodophenyl) diazirine (#1#2#5i-tid) montre une bande radioactive a 70 kd. La composition globale en acides amines de l'ache membranaire est tres proche de la sequence predite par un arn de type t. Nous avons propose une structure tetramerique de l'ache sd ou l'extremite c-terminale de deux sous-unites catalytiques sert a l'ancrage dans les membranes. Cette structure differe du modele precedemment decrit, ou une sous-unite non catalytique de 20 kd, liee par des ponts disulfures aux sous-unites catalytiques, sert a l'ancrage dans les membranes