Recherche Avancée

Thèse soutenue

Les canaux calciques dépendants du voltage : diversité moléculaire et clonage d'une isoforme de neuroblastome de souris

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Auteur / Autrice : Gaspard Coppola
Direction : Michel Lazdunski
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences de la vie
Date : Soutenance en 1993
Etablissement(s) : Nice
Jury : Président / Présidente : Michel Lazdunski
Examinateurs / Examinatrices : Nicolas Glaichenhaus, Jacques Mallet
Rapporteurs / Rapporteuses : Jean-Baptiste Bergé, Joël Nargeot

Résumé

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Des études électrophysiologiques faisant intervenir la technique de patch clamp, complétées par des études pharmacologiques ont permis de décrire trois familles de canaux calciques dépendants du voltage: 1) les canaux rapides t, sans effecteur pharmacologique spécifique ; 2) les canaux lents l, qui sont sites récepteurs de nombreuses familles de drogues telles que les 1-4,dihydropyridines ; 3) les canaux n, ni lents ni rapides, qui sont bloqués par des toxines extraites de gastéropodes marins de la classe des -conotoxines. Une dernière famille de canaux calciques vient d'être caractérisée. Cette classe (canaux de type p) est sensible à une toxine d'araignée (agdenopsis aperta) et très abondante dans les cellules de Purkinje du cervelet. Nous avons isolé, grâce aux techniques de clonage moléculaire et à partir d'une lignée cellulaire de neuroblastomes (n1a103), deux clones d'ADN complémentaires correspondant a deux isoformes d'un même canal calcique apparente au type n. Ces molécules isolées dans les banques d'ADN complémentaires, construites dans le vecteur lambda zap ii, codent pour deux protéines : cachnb1 et cachnb2. Cachnb1 composée de 2289 acides aminés pour une masse moléculaire de 256,591 kda. Cachnb2 composée de 2301 acides aminés pour une masse moléculaire de 257,376 kda. Ces séquences nous ont permis, outre la détermination de la séquence primaire du canal calcique, et de caractériser en particulier dans le système nerveux central l'expression de ce gène. De plus, nous avons repéré des régions de la séquence peptidique variantes, indications de sites putatifs d'épissage alternatif. D'autre part, à l'aide de différentes techniques de détections, soit de la protéine (avec des anticorps polyclonaux), soit de l'ARNm (avec la sonde clonée), nous possédons dorénavant les outils de base pour l'étude de l'expression de ce gène. Plusieurs aspects ont été abordés, notamment le développement et l'expression tissulaire. Par ailleurs, nous avons établi par localisation chromosomique la position du locus du gène sur le chromosome 2 du génome murin