Etude du mecanisme d'action d'un activateur transcriptionnel chez les eucaryotes

Study of the mechanism of action of a eukaryotic transcriptional activator

• Auteur / Autrice : Christel Brou
• Direction : Pierre Chambon
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

L'initiation specifique de la transcription par l'arn polymerase ii requiert l'association de cette enzyme avec les facteurs generaux au niveau du promoteur. De plus, des facteurs se liant specifiquement sur l'adn peuvent activer la transcription. Le domaine activateur acide de vp16, une proteine du virus herpes simplex de type ii, a ete clone en aval du domaine de liaison a l'adn de la proteine de levure gal4, afin d'obtenir la chimere gal-vp16. Cette proteine hybride possede une des plus fortes activites de stimulation de la transcription connue. Le fonctionnement de differents activateurs, dont gal-vp16, a ete etudie in vivo dans des cellules transfectees par des vecteurs exprimant un ou plusieurs activateurs et les plasmides rapporteurs appropries. Cette etude a montre qu'il existe plusieurs types d'activateurs agissant probablement sur des cibles cellulaires distinctes. Gal-vp16 peut activer la transcription dans un systeme in vitro contenant des extraits de cellules hela. En fractionnant ces extraits cellulaires, nous avons mis en evidence un ou plusieurs facteurs intermediaires non necessaires pour la transcription de base, mais indispensables pour la stimulation par gal-vp16. Ces facteurs intermediaires sont etroitement associes au facteur general tbp, au sein de certaines populations de complexes tfiid. Afin d'etudier l'effet de gal-vp16 sur la formation des complexes de preinitiation, nous avons realise des etudes cinetiques utilisant des anticorps monoclonaux contre differents domaines de gal-vp16. Gal-vp16 se lie rapidement et de facon stable sur l'adn, et agit sur la machinerie transcriptionnelle juste apres la formation des complexes engages sur l'adn, contenant tfiia et certains complexes tfiid, pour finalement augmenter le nombre de complexes de preinitiation formes