Analysis of somatostatin peptides secreted by a rat pancreatic endocrine cell line (rint#3): immunodetection an purification of a precursor

• Auteur / Autrice : Christine Lherisson
• Direction : Lucien Pradayrol
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Pharmacologie moléculaire
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Toulouse 3

Mots clés

Mots clés contrôlés

Pancréas

Somatostatine

Résumé

Ces travaux concernent la caracterisation de produits de secretion de cellules tumorales endocrines (rint#3). Une technique d'immuno-transfert adaptee a la detection des peptides somatostatine a ete mise au point. Elle associe une separation electrophoretique suivie d'electrotransfert et une immunodetection. Cette methode confirme l'exportation dans le milieu de culture, de composes de haut poids moleculaire, en particulier une prosomatostatine de 15 kilodaltons. Une faible partie de ce precurseur est retrouvee sous une forme de 29 kd convertible en 15 kd par reduction. La predominance de proformes dans le milieu extracellulaire suggere un defaut dans les processus de maturation post-traductionnels. Cette alteration pouvant etre liee a une modification de la structure primaire du precurseur, sa purification a ete abordee en vue de son sequencage. Pour cela, apres tamisage moleculaire, les modes de separation par echange d'ions et polarite de phase inverse, utilises en chromatographie liquide haute performance ont ete combines. Ils ont permis de separer plusieurs especes immunoreactives, la proforme de 15 kd etant localisee dans les eluats par immuno-transfert. Cependant la necessite d'un enrichissement en materiel immunoreactif a conduit a des etudes de secretion en milieu minimum. Une concentration en calcium extracellulaire de 5 mm stimule de facon maximale la secretion de somatostatine. De meme, l'action du tpa accelere cette secretion d'un facteur 2,5, tandis que la cck et la forskoline n'ont qu'un faible effet