Etude d'un facteur de transcription implique dans l'expression des genes precoces de l'adenovirus : le facteur atf-a. purification, clonage et expression des sequences codantes

Study of a transcription factor implicated in the adenovirus early genes expression: atf-a factor. Purification, isolation and expression of atf-a cdnas

• Auteur / Autrice : MIREILLE GAIRE
• Direction : Claude Kedinger
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

Le gene eiiae d'adenovirus, exprime pendant la phase precoce de l'infection sous le controle des proteines eia virales, est un excellent systeme-modele pour l'etude des mecanismes impliques dans la regulation de l'initiation de la transcription des genes transcrits par l'arn polymerase b. Durant ces dernieres annees la structure detaillee de ce promoteur a ete etablie. Il existe en amont de la tata box atypique plusieurs elements promoteurs, deux sites e2f et un site atf, qui sont essentiels a la fois pour la transcription basale et la transactivation du gene par eia. Nous avons cible notre etude sur l'element promoteur atf qui est egalement retrouve dans d'autres promoteurs precoces de l'adenovirus, eia, eiii, eiv, et dans les promoteurs de certains genes cellulaires. Nous avons purifie jusqu'a homogeneite le facteur de transcription qui se fixe sur cet element atf, a partir de cellules hela. Ce facteur correspond a une phosphoproteine de 40 kd et est capable de stimuler la transcription a partir du promoteur eiiae dans un systeme reconstitue in vitro. Nous avons ensuite clone la sequence codante du facteur atf en criblant une banque d'expression lambda gt11 d'adnc, a l'aide d'une sonde oligonucleotidique correspondant au site de liaison de ce facteur a l'adn. Trois especes d'adnc ont ete isolees codant pour les proteines atf-a+, atf-a, atf-a, qui ne different successivement que par l'absence d'un peptide de 11 et 21 acides amines dans la region nh#2-terminale. Les deux proteines atf-a et -a, les plus etudiees, reconnaissent le site atf/cre sous forme de dimere. Elles sont capables de former des heterodimeres avec la proteine c-jun. Dans des experiences de transfection, les trois proteines atf-a induisent la transcription d'un gene reporter a partir des sites atf de differents genes. Cependant, elles sont incapables de stimuler la transcription du promoteur eiiae en l'absence de la pro