Les effets de la CXCL12/ CXCR4 sur la formation des ganglions lymphatiques

CXCL12/CXCR4 in embryonic lymphatic vasculature and lymph node formation

• Auteur / Autrice : Raheleh Shayan
• Direction : Serge Van De Pavert
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Immunologie
• Date : Soutenance le 25/10/2019
• Etablissement(s) : Aix-Marseille
• Ecole(s) doctorale(s) : Ecole Doctorale Sciences de la Vie et de la Santé (Marseille)
• Jury : Président / Présidente : Philippe Naquet
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Pierre Golstein
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Marie Cherrier, Christopher Mueller

Mots clés

Mots clés contrôlés

Endothélium vasculaire

Cellules stromales mésenchymateuses

Embryons

Noeud lymphatique

Mots clés libres

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Résumé

Nous avons étudié le rôle de l’axe CXCL12 / CXCR4 dans la période initiale de formation de LN, de E12.5 à E14.5. Nous avons utilisé le modèle rapporteur Cxcl12DsRed et généré des embryons de KO généraux à l'aide de Cxcl12DsRed, ce qui nous a permis d'étudier les effets de cette suppression sur les embryons. Il en résultait beaucoup moins de cellules dans le LN anlagen cervical et mandibulaire, ce qui se reflétait dans la quantité totale de LTi4 dans l'embryon. Nous avons également éliminé Cxcr4 de manière conditionnelle sur les CSH en utilisant des souris Vavicre croisées avec des souris Cxcr4flox. Il en résultait moins de cellules LTi dans le LN anlagen mandibulaire. Pour déterminer si l'endothélium des vaisseaux sang est la source de CXCL12 impliquée dans l'initiation de la formation de LN, nous avons utilisé Cxcl12Tie2KO, qui n'a cependant eu aucun effet sur la formation de LN. Pour supprimer Cxcl12 de l'autre source au sein de LN anlagen, les cellules mésenchymateuses, nous avons utilisé NestinCre pour entraîner Cxcl12flox. Dans ce modèle, nous avons observé une diminution modeste du nombre de cellules LTi dans le LN anlagen mandibulaire, mais pas de reflet du Cxcl12 KO complet. Pour établir que CXCL12 est impliqué dans la rétention des cellules LTi au sein du LN anlagen, nous avons bloqué la signalisation CXCR4 juste avant l'isolement des embryons à E13.5 à l'aide de Plerixafor ou AMD31000. Nous avons observé que les cellules LTi ont commencé à sortir du LN anlagen et à former du LN anlagen en vrac et plus étendu. Par conséquent, nous avons conclu que CXCL12 / CXCR4 était impliqué dans la rétention des cellules LTi au sein du LN anlagenuins

We investigated the role of the CXCL12/CXCR4 axis in the initial period of LN formation, from E12.5 until E14.5. We used the Cxcl12DsRed reporter model and generated general KO embryos using Cxcl12DsRed, which allowed us to investigate the effects of this deletion on embryos. It caused significantly less cells in the cervical and mandibular LN anlagen which was reflected in the total amount of LTi4 in the embryo. Also, we conditionally knocked out Cxcr4 on HSCs using Vavicre mice crossed with Cxcr4flox mice. This resulted in less LTi cells in the mandibular LN anlagen. To establish if the blood vessel endothelium is the source of CXCL12 involved in initiation of LN formation, we used Cxcl12Tie2KO, which, however, had no effect on the LN formation. To delete Cxcl12 from the other source within the LN anlagen, the mesenchymal cells, we used NestinCre to drive Cxcl12flox. In this model, we observed a modest decrease in the number of LTi cells in the mandibular LN anlagen but no reflection of the complete Cxcl12 KO. To establish that CXCL12 is involved in retention of LTi cells within the LN anlagen, we blocked CXCR4 signaling just before isolation of the embryos at E13.5 using Plerixafor or AMD31000. We observed that the LTi cells started to move out from the LN anlagen and form loose and more spread LN anlagen. Therefore, we concluded that CXCL12/CXCR4 was involved in retaining the LTi cells within the LN anlagen