Expression et fonction de la protéine de costimulation immune BTN3A : identification du ligand de BTN3A2 pour immunothérapie en cancérologie

par Charlotte Lequeue

Thèse de doctorat en Pathologie humaine. Oncologie

Sous la direction de Daniel Olive et de Jean-Claude Guillemot.

Soutenue le 20-12-2018

à Aix-Marseille , dans le cadre de Ecole Doctorale Sciences de la Vie et de la Santé (Marseille) , en partenariat avec Centre de Recherche en Cancérologie de Marseille (CRCM) (laboratoire) et de Sanofi (entreprise) .

Le président du jury était Eric Parmantier.

Le jury était composé de Eric Parmantier, Emmanuel Scotet, Joëlle Vinh.

Les rapporteurs étaient Emmanuel Scotet, Joëlle Vinh.


  • Résumé

    Des molécules sont présentées aux T Vγ9Vδ2 par une protéine de co-stimulation immune BTN3A.Le membre BTN3A2 est surexprimé dans 4 cancers, et pourrait agir comme récepteur leurre.Récemment, l’isoforme BTN3A2 a été décrite comme régulant la localisation membranaire du BTN3A1 grâce à une hétérodimérisation.L’objectif de mon projet était d’identifier le ligand de BTN3A2 pour une immunothérapie.Ainsi, nous avons tout d’abord sélectionné, par des études de liaison utilisant la cytométrie en flux, quelques lignées cellulaires T exprimant le ligand de BTN3A2. Puis basé sur notre sélection, la comparaison du profil d’expression génique a été effectuée, nous permettant d’établir une liste de protéines membranaires candidats du ligand de BTN3A2,les molécules HLA de classe II. Après génération de lignées cellulaires surexprimant les candidats potentiels de la méthode transcriptomique, ces cellules ont été utilisées pour des tests de liaison avec le BTN3A2-Fc qui se sont révélés négatifs dans les différentes conditions.De plus, la technologie de transfections transitoires puis tests de liaison, a été utilisée pour identifier les récepteurs partenaires potentiels de BTN3A2.Les quatre produits géniques restants ont été sélectionnés, PLPP3, SEMA6A, SEMA6C et MSR1 mais non validés.Finalement, nous avons utilisé un agent de capture avec trois bras, permettant une liaison covalente, qui a montré que BTN3A1 était le candidat potentiel. Dans notre projet, nous avons confirmé l’hétérodimérisation de BTN3A1/A2 et nous avons démontré la forme existante d’hétérodimérisation pour former une voie de signalisation activant les cellules T Vγ9Vδ2.

  • Titre traduit

    Expression and function of the immune co-stimulatory protein BTN3A in cancer : identification of the ligand of BTN3A2 for immunotherapy in cancer


  • Résumé

    Molecules are presented to Vγ9Vδ2 T cells by immune costimulatory protein BTN3A.BTN3A2 which is devoid of a functional intracellular domain, is overexpressed in 4 cancers. Recently, BTN3A2 was described as regulator of subcellular localization of BTN3A1 thanks to heterodimerization. The aim of our project, was to identify the ligand of BTN3A2 for immunotherapy. Therefore, we have first selected by binding studies using flow cytometry, few T cell lines expressing BTN3A2 ligand.Based on the selection, a gene expression profile comparison was performed and allowed us to establish a list of membrane proteins expressed only in positive cell lines, BTN3A2 ligand candidates. The highest FC were found for HLA class II molecules. Cell lines overexpressing potential candidates of transcriptomic method were used for binding assays using BTN3A2-Fc, but were negative in all conditions. Then cell microarray technology was used to identify potential receptor partners of BTN3A2. 4 remaining gene products were selected, PLPP3, SEMA6A, SEMA6C and MSR1. The validation of these candidates was not done after transient transfection and binding test with BTN3A2-Fc (using flow cytrometry). Moreover, chemoproteomic experiments were performed to isolate and identify by mass spectrometry (MS) BTN3A2 ligand. Therefore, we used an original capture reagent (TFR) with three moieties, allowing covalent binding, which showed clearly BTN3A1 as a potential candidate. In our project, we have confirmed the heterodimerization of BTN3A1/A2 and we have demonstrated an existing form of heterodimerization that could interact with other proteins, to form a signaling pathway activating Vγ9Vδ2 T cells.



Le texte intégral de cette thèse sera accessible librement à partir du 20-12-2020

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