Régulation épigénétique et protéique de p73 dans le Myélome Multiple

Epigenetic and post-translational régulation of p73 in Multiple Myeloma

• Auteur / Autrice : Pierre Gillardin
• Direction : Agnès Moreau-Aubry, Catherine Pellat-Deceunynck
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie des organismes
• Date : Soutenance le 15/12/2017
• Etablissement(s) : Nantes
• Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Biologie-Santé (Nantes)
• Partenaire(s) de recherche : COMUE : Université Bretagne Loire (2016-2019)
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Centre de Recherche en Cancérologie et Immunologie Intégrée Nantes Angers
• Jury : Président / Présidente : Brigitte Sola
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Jérôme Moreaux

Mots clés

Mots clés contrôlés

Agents alcoylants

Méthylation

Myélome multiple

Mots clés libres

Décitabine

P53

P73

Résumé

Les anomalies de TP53, que sont la délétion génique associée ou non à des mutations somatiques, demeurent un facteur de résistance au traitement dans le Myélome Multiple (MM) malgré l’introduction de nouveaux agents thérapeutiques. Pour contourner les anomalies de TP53, nous avons étudié la possibilité d’activer p73, un membre de la famille de p53, qui n’est pas fréquemment muté dans les cancers. Nous avons étudié l’expression, la méthylation et la régulation de TP73 dans une collection de lignées de MM sauvages ou déficientes pour p53. Nous montrons que TP73 est rarement exprimé et surtout dans les lignées TP53 sauvage. Nous avons étudié la méthylation de l’ilot CpG situé en amont du gène par MS-PCR et montré que l’absence d’expression correspond à son hyperméthylation, qui peut néanmoins être réversée par la décitabine, un inhibiteur de la méthylation. Malgré l’augmentation d’expression de TP73, la décitabine ne permet pas une expression protéique significative de p73. Pour étudier la régulation de p73, nous avons utilisé des agents alkylants, des inhibiteurs de MDM2 et du protéasome. Nous montrons que les nutlin3a et MG132, ne stabilisent pas p73 mais diminuent son expression constitutive. Les agents alkylants induisent une augmentation de p73 mais uniquement dans les lignées TP53 sauvage et l’extinction de p53 par ARN interférence inhibe cette régulation. Dans les lignées déficientes pour p53, la décitabine augmente l’expression génique mais le melphalan ne permet pas de stabilisation de la protéine. L’ensemble de nos résultats montre que TP73 n’apparaît pas être un bon candidat pour contourner les anomalies de TP53.

TP53 deficiency remains a major adverse event in Multiple Myeloma despite therapeutic progresses. p73, a member of p53 family, is very rarely mutated and has been poorly studied in myeloma. Using human myeloma cell lines with different TP53 status, we assessed methylation, expression and regulation of TP73. We report that TP73 is silenced by methylation and that decitabine increases its expression, which remains however insufficient for significant protein expression. Alkylating drugs increase expression of TP73 only in TP53wt cells and fail to synergize with decitabine in p53 deficient cells. On the other hand, MG132 and nutlin-3a don’t stabilize p73 in response to in TP53wt p73 positive cell lines. TP73 does not appear as a promising target for bypassing p53 deficiency in Multiple Myeloma.