Etude du rôle de CDC42 et de ses effecteurs dans la formation des proplaquettes

par Alberta Palazzo

Thèse de doctorat en Médecine. Hématologie et oncologie

Sous la direction de Najet Debili.


  • Résumé

    Les réarrangements du cytosquelette sont essentiels pour la libération de plaquettes. Les RHO-GTPase, en tant que régulateurs du cytosquelette d'actine, joue un rôle important dans la formation de proplaquettes. Dans plusieurs processus cellulaires, CDC42 joue un rôle opposé à RHO/ROCK, qui régule négativement la formation de proplaquettes. Nous montrons que l'activité CDC42 augmenté pendant la différenciation des mégacaryocytes (MK). L’inhibition chimique via la CASIN aussi que l’utilisation d'une forme constitutionnellement active et d’une dominante négative de CDC42 ont montré que le CDC42 régule positivement la formation de proplaquettes. Ensuite nous avons investigué les effecteurs de CDC42 pour déterminer lequel est impliqués dans la formation de proplaquettes. Nous nous sommes d'abord concentrés sur PAK2, qui récemment chez la souris a été montré être activé par CDC42 dans la formation de proplaquettes. En utilisant des inhibiteurs chimiques et un shRNA contre PAK2, nous avons déterminé que, chez l'homme, PAK2 a un effet marginal sur la différenciation terminal des MKs. Donc nous avons étudié la famille WASP. Nous avons déterminé que N-WASP, mais pas WASP, était impliqué dans la formation de proplaquettes. L’ablation de N-WASP, entraîne une diminution marquée de la formation de proplaquettes pour un défaut dans le système de membrane de démarcation (DMS). Ceci a été associé à l'activation de RHOA, et a une concomitante augmentation de la phosphorylation de MLC2 sur Ser19. L’activation de N-WASP augmente pendant la différenciation MK. L'inhibition de la phosphorylation de N-WASP par deux inhibiteurs de la famille de Src kinase familiale, PP2 et Dasatinib, entraine la diminution de la formation de proplaquettes. Nous concluons que N-WASP, mais pas WASP régule positivement le développement du DMS et la formation de proplaquettes et que les kinases de la famille Src en association avec CDC42 régulent la formation de proplaquettes via N-WASP.

  • Titre traduit

    Role of CDC42 and its effectors on human proplatelets formation


  • Résumé

    Cytoskeleton rearrangements are essential in platelet release. The RHO small GTPase family, as regulators of the actin cytoskeleton, plays an important function in proplatelet formation. In many cellular processes, CDC42 plays an opposite role to RHO/ROCK, which negatively regulates proplatelet formation. We show that CDC42 activity increased during megakaryocyte (MK) differentiation. Use of a chemical inhibitor CASIN or of an active or a dominant-negative form of CDC42 demonstrated that CDC42 positively regulates proplatelets formation. We determined which CDC42 effectors were involved in proplatelets formation. We first focused on PAK2, which was recently shown in mouse to be activated by CDC42 and regulate proplatelets formation. Using chemical inhibitors and an shRNA against PAK2, we determined that in human, PAK2 only has a marginal effect on terminal MK differentiation. Therefore, we switched our study towards the WASP family. We determined that N-WASP but not WASP was involved in proplatelets formation. N-WASP knock-down, led to a marked decrease in proplatelets formation due a defect in the demarcation membrane system (DMS). This was associated with RHOA activation, and a concomitant augmentation in the phosphorylation of MLC2 on Ser19. N-WASP phosphorylation, a primed form of N-WASP, increased during MK differentiation. Phosphorylation inhibition by two Src family kinase inhibitors, PP2 and Dasatinib, decreased proplatelets formation. We conclude that N-WASP, but not WASP positively regulates the DMS development and proplatelets formation and that the Src family kinases in association with CDC42 regulate proplatelets formation through N-WASP.

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