Analyse fonctionnelle des mutations constitutionnelles hétérozygotes du gène suppresseur de tumeur TP53 dans le contexte génétique des patients atteints du syndrome de Li-Fraumeni

par Yasmine Zerdoumi

Thèse de doctorat en Biologie moléculaire, Génétique

Sous la direction de Thierry Frebourg.

Les rapporteurs étaient Richard Iggo, Marc Billaud.


  • Résumé

    Le syndrome de Li-Fraumeni (LFS), qui résulte d’altérations constitutionnelles hétérozygotes du gène TP53, représente l’une des formes héréditaires de cancer les plus graves. Afin de déterminer les bases moléculaires du gradient de sévérité clinique des mutations de TP53, nous avons étudié les conséquences fonctionnelles des différentes classes de mutation de TP53 dans le contexte génétique des patients LFS, et nous avons montré que les mutations faux-sens de TP53 associées à un effet dominant négatif altèrent drastiquement la réponse de p53 aux lésions de l’ADN en comparaison avec les mutations nulles, dans les cellules non tumorales des patients LFS, définissant ainsi un véritable endophénotype de gravité. Grâce au développement d’une version simplifiée de l’essai fonctionnel, nous avons pu confirmer ces observations. L’analyse de ChIP-Seq, que nous avons mise au point, nous a permis de montrer que l’altération drastique de la réponse transcriptionnelle de p53 aux lésions de l’ADN dans les lymphocytes de patients LFS porteurs d’une mutation faux-sens à effet dominant négatif résulte d’une altération de fixation de p53 sur l’ADN. Afin de montrer la contribution des chimiothérapies dans la survenue des cancers primitifs multiples dans le LFS, nous avons développé un nouveau test de génotoxicité nommé p53 genotoxicity assay, et nous avons montré que toutes les classes de chimiothérapies que nous avons testées, à l’exception des poisons du fuseau mitotique, sont fortement génotoxiques. Ainsi, l’ensemble de nos résultats montrent que les mutations de TP53 agissent comme des mutations permissives permettant aux stimuli oncogéniques de conduire à une transformation maligne.


  • Résumé

    Li-Fraumeni Syndrome (LFS), resulting from heterozygous germline mutations of TP53, is one of the most severe hereditary cancer syndromes. In order to determine the molecular basis of the clinical gradient of germline TP53 mutations, we studied the functional consequences of the different types of TP53 mutations in the genetic context of the patients, and we showed that TP53 missense mutations with dominant-negative effect alter the p53 transcriptional response to DNA damage more drastically than null mutations. These results indicate that the impact of the mutations on p53 transcriptional response to DNA damage in LFS lymphocytes can be considered as an endophenotype of the clinical severity of germline TP53 mutations. The use of the simple p53 functional assay allowed us to confirm these observations on a large number of mutations. ChIP-Seq analysis performed on lymphocytes derived from TP53 wild-type control subject and LFS patient with TP53 dominant-negative missense, showed that the drastic alteration of p53 transcriptional response to DNA in LFS lymphocytes harboring dominant negative missense mutations, is explained by a massive and global alteration of p53 DNA binding. In order to determine the causative role of chemotherapies in the appearance of secondary tumours in LFS, we developed a new genotoxicity assay, named the p53 genotoxicity assay. This assay allowed us to show that most of the drugs commonly used in cancer treatment, except the microtubule poisons, are highly genotoxic. Thus, in TP53 mutation carriers, germline TP53 mutations represent a genetic permissive context facilitating the malignant transformation of cells in which DNA damage has occurred.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (223 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 311 références

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  • Bibliothèque : Université de Rouen. Service commun de la documentation. Section sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 16/ROUE/S035
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