Rôle des sphingolipides et des MAM dans l'activité des protéines pro-apoptotiques Bax et Bak

par Vincent Mignard

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire. Cancérologie

Sous la direction de François Vallette.

Le jury était composé de Pascal Reynier, François Paris, Stephen Manon.

Les rapporteurs étaient Olivier Cuvillier, Dominique Ardail.


  • Résumé

    L'étude de l'apoptose est importante pour développer de nouvelles stratégies anti-cancéreuses. La voie mitochondriale de l'apoptose est finement régulée par le réseau d'interaction des protéines de la famille Bcl-2. D'autres acteurs moléculaires participent à la régulation de l'apoptose et notamment une famille de lipides bioactifs : les sphingolipides. De plus, des études récentes permettent d'envisager que les interactions entre le réticulum endoplasmique (RE) et la mitochondrie (via une région spécifique du RE appelée MAM) interviennent également dans la régulation de l'apoptose. Nous avons mis au point un protocole de fractionnement subcellulaire permettant de séparer une fraction mitochondriale, des mitochondries purifiées et les MAM, puis analysé les compositions protéiques et lipidiques de ces fractions (par WB et HPLC-MS). Nous avons ensuite comparé les compositions de ces fractions à l'état basal et en conditions apoptotiques. Nos résultats montrent que l'induction de l'apoptose induit une redistribution des protéines de la famille Bcl-2 avec notamment la transduction de Bax au niveau des mitochondries et des MAM ainsi qu'une forte augmentation de l'expression de la protéine Bcl-2 au niveau des MAM. En ce qui concerne les profils lipidiques, l'induction de l'apoptose entraine une augmentation du taux de céramide dans les mitochondries et une diminution du taux de sphingomyéline dans les MAM. L'ensemble de nos résultats suggère que les MAM pourraient jouer un rôle important dans la localisation subcellulaire des protéines de la famille Bcl-2 au cours de l'apoptose, potentiellement via la synthèse et/ou le trafic des sphingolipides.

  • Titre traduit

    Role of sphingolipids and MAM in the control of Bax and Bak proapoptotic activity


  • Résumé

    The study of apoptosis is important to develop new anti-cancer strategies. The mitochondrial apoptotic pathway is tightly regulated by the interaction network of the Bcl-2 family proteins but other molecular actors are involved in the régulation of apoptosis, in particular, a family of bioactive lipids : sphingolipids. The recent studies have shown that the interactions between endoplasmic reticulum (ER) and mitochondria (via a specific region of the ER called Mitochondria associated membrane, MAM) are also involved in the regulation of apoptosis. We have developed a subcellular fractionation protocol for the isolation of mitochondria fraction, purified mitochondria and MAM. The proteic and lipidic compositions of these fractions were analyzed by WB and HPLC-MS. We compared the compositions of subcellular fractions at normal and apoptotic conditions. Our results show that induction of apoptosis causes the redistribution of the Bcl-2 family proteins including Bax transduction to mitochondria and MAM and an important increase of Bcl-2 expression at MAM Regarding lipid profiles, inductions of apoptosis increases ceramide level at mitochondria and decreases sphyngomyelin in the MAM fraction. Taken together, these results may suggest that the MAM could play an important role in the subcellular localization of Bcl-2 family proteins during apoptosis, potentially through synthesis and/or trafficking of sphingolipids.

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  • Détails : 1 vol. (156 f.)
  • Annexes : Bibliogr. 252 réf.

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  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : 15 NANT 05-VS
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