Nouvelle stratégie de ciblage de la GTPase RhoB : développement d'intracorps conformationnels sélectifs et leur fonctionnalisation en tant qu'inhibiteurs intracellulaires de l'activité de RhoB

par Nicolas Bery

Thèse de doctorat en Biotechnologies, cancérologie

Sous la direction de Gilles Favre et de Aurélien Olichon.

Soutenue en 2014

à Toulouse 3 .


  • Résumé

    La GTPase RhoB partage 85% d'homologie avec RhoA et RhoC. Ces protéines alternent entre deux conformations : une active liée au GTP et une inactive liée au GDP. Des dérégulations de leur expression et de leur activation sont retrouvées dans de nombreux cancers. A ce jour, aucun inhibiteur sélectif de ces GTPases n'a pu être développé afin de bloquer l'activité de l'une ou l'autre de ces Rho. Ce travail doctoral a permis de mettre au point une approche innovante ciblant sélectivement l'état activé de la protéine RhoB. Suite à la caractérisation d'une nouvelle banque d'anticorps à simple domaine, sa validation par phage display contre divers antigènes a fourni de nombreux anticorps de haute fonctionnalité dans plusieurs applications. L'établissement d'une stratégie de sélection directe d'anticorps intracellulaire (intracorps) dirigés contre RhoB a permis d'identifier plusieurs intracorps conformationnels de la forme active de RhoB, dont un discriminant RhoB de ses homologues RhoA et RhoC. La fonctionnalisation d'intracorps par un domaine Fbox conduisant une dégradation de la cible a ensuite fourni la première stratégie efficace d'inhibition sélective de l'activité de RhoB. Ces travaux ont notamment démontré que l'extinction de l'activité de RhoB par intracorps fonctionnalisé augmente la migration et l'invasion de cellules pulmonaires. Ainsi cette avancée permettra de déterminer si l'activité de RhoB peut être une nouvelle cible thérapeutique et ouvre de nouvelles perspectives d'étude fine de l'activité des GTPases.

  • Titre traduit

    A new way to target RhoB GTPase : set up of selective conformational intrabodies and their functionalization to promote inhibition of small GTPase RhoB cellular activity


  • Résumé

    RhoB GTPase shares more than 85% of homology with RhoA and RhoC. These proteins switch between an active conformation bound to GTP and an inactive one bound to GDP. Deregulations of their expression and/or their activity are often found in many cancers. To date, no selective inhibitor of these GTPases has been developed in order to block selectively Rho's activity. This project showed an original approach targeting RhoB's activity. After a new single domain antibody library characterization, its validation using the phage display technology against various antigens gave many highly functional antibodies in many applications. Set up of a new direct screening strategy of intracellular antibody (intrabody) raised against RhoB allowed us to identify several conformational intrabodies of RhoB active form, one of them discriminating RhoB from its homologs RhoA and RhoC. Intrabody functionalization with an Fbox domain driving target to degradation led to the identification of the first efficient selective RhoB activity inhibitory strategy. These work demonstrated that RhoB activity knockdown with functionalized intrabodies increased migration and invasion of pulmonary cells. In conclusion this tool will allow to determine if RhoB activity could be a new therapeutic target and open new perspectives to study GTPases activity.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (206 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 177-199

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  • Bibliothèque : Université Paul Sabatier. Bibliothèque universitaire de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2014 TOU3 0277
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