Cellules dendritiques tissulaires dans la maladie du greffon contre l’hôte : phénotypes, mécanismes de recrutement et interactions avec lymphocytes T CD4+

par Sarah Morin

Thèse de doctorat en Hématologie et oncologie

Sous la direction de Gérard Socié.

Soutenue en 2014

à Paris 7 .


  • Résumé

    La maladie du greffon contre l'hôte (GVHD) est une complication grave de la greffe de cellules souches hématopoïétiques qui en limite l'utilisation. Nous faisons ici l'hypothèse que les cellules présentatrices d'antigènes (APC) tissulaires interagissent avec les lymphocytes T alloreactifs dans les organes cibles de la GVHD tels que la peau et l'intestin. Un premier volet de mon travail de thèse était de caractériser les cellules dendritiques (DC) dans les lésions de GVHD au niveau intestinal et cutané, ainsi que les mécanismes du recrutement des précurseurs de ces cellules pendant la GVHD. J'ai utilisé un modèle murin Complexe Majeur d'Histocompatibilité (MHC) compatible, avec un minor-mismatch (donneur B6 (H2b), receveur 129 (H2b),). J'ai pu démontrer que DC dérivées de la moelle osseuse du donneur sont recrutées dans le derme et dans la lamina propria (LP) intestinale au cours de la GVHD. J'ai ensuite chercher à identifier les mécanismes de recrutement des DC, et pour cela j'ai testé 3 récepteurs de chemokines: CCR2, CCR6 et CX3CR1. J'ai effectué des expériences de repopulation en mettant en compétition de la moelle osseuse KO et wt pour un récepteur donné. Aucun des trois récepteurs testés n'est requis pour le recrutement des précurseurs au niveau tissulaire. Dans un second projet, j'ai utilisé la microscopie intra-vitale bi-photonique (2PIM), pour observer et quantifier les interactions entre DC du donneur et lymphocytes T CD4+ en utilisant le même couph donneur/receveur, avec de la moelle osseuse provenant de souris CD11c-YFP+ et des lymphocytes T CD4+ provenant de souris RFP+. Mon but était ici de montrer que les interactions entre les lymphocytes T CD4+ et les DC tissulaires sont spécifiques. J'ai d'abord caractérisé les lésions de GVHD dans la peau (derme) et pu observer leur stabilité. J'ai ensuite injecté un anticorps anti-MHCII tout en continuant d'imager le derme. La vitesse moyenne des lymphocytes T a augmenté après l'injection de l'anticorps, ce qui suggère que ces interactions sont, au moins en partie, dépendantes de MHCII. En utilisant d'autres stratégies expérimentales, j'ai cherché à montrer que les lymphocytes T CD4+ étaient en contact spécifiquement avec les DC du donneur. Ces expériences n'ont pas permis de démontrer d'interactions spécifiques avec les DC du donneur, ce qui évoque la possibilité que d'autres CPA sont à l'origine de ces interactions impliquant MHCII


  • Résumé

    PGraft-versus-host disease (GVHD) limits the broader application of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. In prior studies the Shlomchik lab defmed roles for both host and donor-derived antigen presenting cells (APCs) in the activation of alloreactive donor T cells and in promotion of GVHD. While initial T cell activation in GVHD occurs predominantly in secondary lymphoid organs, they have consistently observed mHor donor-derived APCs, including dendritic cells (DCs), in histopathologic GVHD lesions, frequently adjacent to infiltrating T cells, suggesting these have a role in local GVHD reactions. Donor-derived tissue APCs (t-APCs), including tissue-DCs (t¬DCs) could activate donor T cells through indirect or cross-presentation of host antigens, produce chemokines that recruit other effectors, and elaborate inflammatory mediators or suppressors of inflammation. I first characterized t-DC in the skin and bowel of GVHD-affected mice in a MHC-matched, minor-antigen (miHA) mismatched system (B6 (H-2b) into 129 (H-2b)). I found that t-DCs accumulated in the dermis and intestinal lamina propria (LP) during GVHD. I next studied the roles of CCR2, CCR6 and CX3CR1 in the recruitment of donor-derived APCs to skin and bowel. To study the role of CCR2 I first compared mice transplanted with either wt or CCR2 KO BM with wt T cells. Despite having a profound reduction in blood monocytes, ail skin and bowel t-APC subsets were present in CCR2 KO recipients, indicating that CCR2 is not required for t-APC recruitment in contrast to its role in many other models of inflammation. Despite monocytopenia, recipients of CCR2 KO BM developed histological GVHD. To better defme the contributions of CCR2, CCR6 and CX3CR1 to t-APC recruitment, I transplanted mice with CCR2, CCR6 or CX3CR1 KO BM in competition with wt BM and compared ratios of BM and blood precursors (pre-cDCs and monocytes) to t-DC ratios. I found that neither CCR2, CCR6 or CX3CR1 are important for precursor migration to tissues. In a second project, I utilized two-photon infra-vital microscopy (2PIM) to analyze interactions between fluorescent donor CD4+ T cells and t-DCs in skin, in the same system, using CD11c-YFP+ BM with B6 RFP+ CD4+ T cells and nonfluorescent B6 CDS+ T cells. I imaged ear skin in GVHD mice —4 weeks later. In general, CD4' T cells co-localized with DCs. I observed CD4+ T cells that were highly motile and only in transient contact with DCs and others, more numerous, that made stable contact with DCs. To determine how much TCR: MHCII interactions drive sustained CD4+ T cell: DC interactions and arrest CD4+ T cell motility, mice were imaged and then injected with an MHCII blocking antibody (Ab; Y3P) with continued imaging of the same regions. After injection, T cell mean speed significantly increased and the proportion of T cells in stable contact with DCs decreased, indicating that transient disruption of TCR: MHCII is sufficient to restore motility to some T cells. In a second approach to assess the specificity of CD4+ T cell: t-DC interactions I transplanted 129 mice with B6 RFP+ CD4+ cells, nonfluorescent CD8+ T cells and a mix of CD11c-YFP+ MHCII KO and RFP± wt BM or a mix of CD11c-YFP± wt and RFP+ MHCII KO BM. Surprisingly, CD4+ T cell contact durations with MHCII KO CD11c-YFP+ cells were not shortened, suggesting that CD4+ T cell could be making contact with other donor-derived APCs or recipient non-hematopoietic APCs. Because the graft-versus-leukemia effect occurs primarily in bone marrow and secondary lymphoid tissues, targeting of tissue-infiltrating APCs could represent a unique strategy to ameliorate GVHD while preserving GVL.

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  • Détails : 1 vol. (92 f.)
  • Annexes : 161 réf.

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  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2014) 230
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