Développement de modèles d’analyse de fonction de gènes in vitro pour l’étude de la Shbgb chez la truite arc-en-ciel

par Elisa Marivin

Thèse de doctorat en Biologie et agronomie

Sous la direction de Alexis Fostier.


  • Résumé

    La connaissance des régulations de la différenciation sexuelle et de l’ovogénèse des poissons est un enjeu majeur en aquaculture. Un des points communs de ces deux étapes est la régulation liée à la synthèse et l’activité des stéroïdes, notamment celles des oestrogènes. Shbg est une protéine de liaison aux stéroïdes sexuels dont les principales fonctions seraient la protection des stéroïdes, leur transport et la médiation du signal stéroïdien. Deux paralogues ont été identifiés chez la truite arc-en-ciel, Oncorhynchus mykiss, Shbga principalement exprimée par le foie et sécrétée dans le sang, et Shbgb exprimée par les cellules de la granulosa au sein de l’ovaire. Au cours de ce travail de thèse, la plus grande spécificité de liaison de l’oestradiol et de la testostérone par la Shbgb recombinante a été confirmée. L’expression de shbgb dans les granulosa et son lien avec l’aromatase gonadique à des étapes précoces de la gonadogenèse ont été montrés. Shbgb a une action de protection de la testostérone vis-à-vis de son aromatisation ce qui pourrait participer au maintien de hauts niveaux de testostérone chez la femelle de salmonidé. Afin d’étudier les fonctions et régulations de Shbgb, des cultures primaires de cellules de la granulosa ont été mises en place. La régulation de l’expression de shbgb parait évoluer au cours de l’ovogenèse et il serait utile d’évaluer finement l’implication des stéroïdes sexuels. Enfin, plusieurs méthodes de transfection de ces cellules, cultivées à 12°C, ont été essayées. L’électroporation est nettement plus efficace que les transfections chimiques. Cependant, elle s’avère délétère pour les capacités stéroidogènes des cellules. Ces résultats doivent permettre d’aider les choix méthodologiques de transfection de cellules primaires de poisson et montrent l’importance d’analyser de manière approfondie leurs effets secondaires.


  • Résumé

    A major issue in aquaculture is improving knowledge about sexual differentiation and oogenesis in fish. Their regulation particularly involves the synthesis and action of sexual steroids, especially estrogens. Shbg is a sex hormone-binding globulin whose major functions may be protection and transport of steroids and modulation of steroids signaling. Two paralogs have been identified in rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, Shbga, majorly expressed by the liver and secreted into the blood, and Shbgb, expressed in the ovary by granulosa cells. Our results confirm a higher binding specificity of recombinant Shbgb for estradiol and testosterone. Shbgb expression in granulosa cells and its link with aromatase at early stages of gonadogenesis have been demonstrated. Shbgb has been shown to be implicated in testosterone protection against its aromatization and that could be a way to maintain high testosterone levels in female salmonids. In order to study Shbgb functions and regulations, primary cultures of granulosa cells were developed. Shbgb expression regulation was shown to evolve during oogenesis and the role of sexual steroids would be worth to be further studied. . Finally, several transfections methods for these cells, maintained at 12°C, were tested. Electroporation was clearly more efficient than chemical transfection. Nonetheless, electroporation can be deleterious for the cells steroidogenic properties. These last findings provide information for choosing wisely transfection methods to be used on fish cells primary culture and show that the accurate analysis of the effects of these methods by themselves is crucial for a relevant data interpretation.

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  • Détails : 1 vol. 248 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. (237-245 p.)

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  • Disponible pour le PEB
  • Cote : B 248
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