Leucémie lymphoïde chronique et microenvironnement : stimulation du récepteur B à l'antigène et régulation de l'expression membranaire du CXCR4 par les protéines kinases D

par Stéphane Saint-Georges

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et moléculaire

Sous la direction de Dominique Ledoux.

Soutenue en 2013

à Paris 13 .


  • Résumé

    L’évolutivité de la Leucémie Lymphoïde Chronique (LLC) se caractérise par la présence d’adénopathie résultant d’une accumulation de lymphocytes B (LB) pathologiques au sein du microenvironnement ganglionnaire. La stimulation antigénique joue un rôle important dans le trafic intra-ganglionnaire des LB suggérant qu’elle puisse jouer un rôle dans la rétention/accumulation des LB pathologiques au sein des ganglions. Dans ce contexte nous avons étudié l’impact in vitro de la stimulation antigénique des cellules de LLC sur l’expression d’effecteurs clés du trafic ganglionnaire des LB. Nous avons d’abord montré que la stimulation du récepteur B à l’antigène (BCR) entraine une diminution de l’expression membranaire du CXCR4 et du CD62L associée à une diminution de la migration et de l’adhésion in vitro des LB de LLC. De plus, l’intensité de la down-régulation du CXCR4 et du CD62L en réponse à la stimulation du BCR est associée à des marqueurs de mauvais pronostique et corrélé à la survie sans progression des patients LLC. Nous avons ensuite analysé les voies de signalisation activées en aval du BCR et impliquées dans l’internalisation du CXCR4 dans les LB de LLC. L’utilisation d’inhibiteurs de la PI3K (LY294002, CAL101) et des protéines kinases D (Gö6976, CID755673) entraîne une inhibition complète de la down-régulation du CXCR4 dépendante de la stimulation du BCR, révélant un rôle de ces kinases dans ce processus. D’un point de vue fonctionnel, la stimulation du BCR induit une phosphorylation/activation des PKD2 et/ou PKD3 de manière dépendante de la PI3K et le taux d’induction de la phosphorylation des PKD2/3 est corrélé à l’intensité de downrégulation du CXCR4. Enfin, l’activation du BCR induit une phosphorylation du CXCR4 sur des résidus impliqués dans l’internalisation du récepteur, suggérant que ce processus d’endocytose est en partie placé sous le contrôle des PKD. En conclusion, nos résultats ont permis de mettre en évidence une implication de la PI3K et des PKD dans la down-régulation du CXCR4 membranaire en réponse à une activation du BCR. Ces données suggèrent que ces protéines pourraient jouer in vivo un rôle dans la perturbation du trafic ganglionnaire des LB de LLC en réponse à la stimulation antigénique.

  • Titre traduit

    Chronique Lymphocytic Leukaemia microenvironment : B-cell receptor stimulation and modulation of CXCR4 membrane expression by protein kinase D


  • Résumé

    Chronic Lymphocytic Leukaemia (CLL) progression involves enlargement of lymph nodes due to an accumulation of CLL B cells into the nodal microenvironment. The crucial role of the antigenic stimulation through the B cell receptor (BCR) in normal B cell trafficking into the lymph nodes suggests that BCR engagement might be implicated in the CLL B cell retention/accumulation into the lymphatic compartment. In this context, we focused our efforts on the study of the impact of an in vitro antigenic stimulation on the expression of key effectors involved in CLL B trafficking. First, we demonstrated that BCR stimulation decreased CXCR4- and CD62L-membrane expressions; this decrease was associated to an in vitro reduction of CLL B cell migration and adhesion. Moreover, the intensity of CXCR4- and CD62L- down-regulation upon BCR stimulation was linked to unfavourable prognostic markers and correlated to CLL patients’ progression free survival. Next, we analysed the activated BCR signalling cascades that were involved in CXCR4 internalization of CLL B cells. The LY294002/CAL101-PI3K and Gö6976/CID755673-PKD inhibitors blocked BCR-dependent CXCR4 down-regulation, revealing the role of the PKDs in this process. Functionally, BCR triggering induced PKD2/3 phosphorylation/activation in a PI3K-dependent manner. Interestingly, the level of the phospho-PKD2/3 induction was correlated to the intensity of BCR-dependent CXCR4 down-regulation. Furthermore, BCR engagement allowed CXCR4 phosphorylation on specific residues involved in its internalization, suggesting that CXCR4 endocytic process was partially regulated by PKDs. Altogether, our results demonstrated the PI3K and PKD implications on cell surface CXCR4 downregulation in response to BCR stimulation. These data proposed that PI3K and PKDs could play a role in the altered lymphatic trafficking of CLL B cells upon BCR engagement.

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Informations

  • Détails : 1vol. (126p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 113-126

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  • Bibliothèque : Université Paris 13 (Villetaneuse, Seine-Saint-Denis). Bibliothèque universitaire. Section Sciences.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TH 2013 078
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