Etudes des mécanismes contrôlant la réplication du virus de l'Hépatite B dans le contexte de l'infection : rôle de la protéine virale HBx et des protéines cellulaires PRMT1 et Spindlin1

par Aurélie Ducroux

Thèse de doctorat en Virologie

Sous la direction de Christine Neuveut.

Soutenue en 2013

à Paris 7 .


  • Résumé

    Dans le noyau des hépatocytes, le génome viral est organisé sous la forme d'un mini-chromosome (ADNccc), associé à des histones et à des protéines non-histone. L'ADNccc est soumis à des modifications de la chromatine qui vont contrôler sa transcription. La protéine virale HBx, est essentielle à la réplication virale. HBx joue un rôle fondamental dans l'établissement d'une transcription active de l'ADNecc au cours de l'infection, cependant les mécanismes moléculaires mis en jeu restent encore à déterminer. Dans le but d'élucider les mécanismes impliqués dans l'activité transactivatrice d'HBx, nous avons isolé par purification par affinité ses partenaires nucléaires. Deux protéines issues de cette purification ont fait l'objet d'une étude fonctionnelle : PRMT1 et Spindlinl. Nous avons montré que PRMT1 exerce une inhibition sur la transcription virale via son activité méthyltransférase et qu'HBx est capable de contrecarrer cette activité. Nous avons montré par ChIP que Spindlinl est recrutée sur l'ADNecc au cours de l'infection ce qui corrèle avec une diminution des ARNm viraux. Nous avons mis en évidence par des expériences de « run-on » nucléaires que Spindlinl agit au niveau de la transcription du VHB. Enfin nous avons montré qu'HBx est capable de contrecarrer en partie cette répression en diminuant le recrutement de Spindlin1 sur l'ADNecc. Nous avons montré que Spindlinl réprime la transcription d'un autre virus à ADN, HSV1. Pour comprendre les mécanismes moléculaires mis en jeu par Spindlin1 dans la régulation de la transcription nous avons isolé les partenaires de Spindlin1.

  • Titre traduit

    Study of the mechanisms controlling the hepatitis B virus replication in the context of infection : role of the viral protein HBx and the cellular protein PRMT1 and spindlin1


  • Résumé

    In the nucleus of hepatocyte, the viral genome is organized into a mini-chromosome (cccDNA), associated with histones and non-histone proteins. The cccDNA is subject to epigenetic regulation that controls its transcription. The viral regulatory protein HBx is essential for viral replication. HBx plays a fondamental role in the establishment of an active transcription from the cccDNA during infection, however, the molecular mechanisms involved are still poorly understood. To elucidate the mechanisms involved in the transactivating activity of HBx, we isolated by affinity purification its nuclear partners. We focused on two partners: PRMT1 and Spindlin1. We have shown that PRMT1 exerts inhibition of HBV transcription via its methyltransferase activity and that HBx is able to counteract this activity. We have shown by ChIP that Spindlinl is recruited onto cccDNA during infection. This recruitment correlates with a decrease in viral mRNAs. We demonstrated by nuclear mn-on experiments that Spindlinl acts on HBV transcription. In addition, we showed that HBx is able to partially counteract this repression by decreasing Spindlin1 recruitment onto cccDNA. Importantly, we also showed that Spindlinl represses the transcription of another DNA virus (HSV-1), suggesting that it may be involved in a broader anti-viral response. Finally, in order to elucidate further the molecular mechanisms of viral transcriptional repression by Spindlinl and its functional interaction with HBx, we isolated Spindlinl partners by affinity purification.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (202 f.)
  • Annexes : 430 réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2013) 179
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