Remaniements rationnel de la protéine d'enveloppe virale et de ses domaines pour la détection des infections à flavivirus et l'étude d'interactions avec ses récepteurs

par Nora Zidane

Thèse de doctorat en Biomolécules, biologie structurales, pathologies, biothérapies

Sous la direction de Hugues Bédouelle.

Soutenue en 2013

à Paris 7 .


  • Résumé

    La protéine d'enveloppe des Flavivirus comprend 3 ectodomaines et un segment membranaire. J'ai caractérisé les propriétés de son domaine III (ED3) in vitro. J'ai mesuré la stabilité thermodynamiques d'ED3 par des expériences d'équilibres de dépliement, induits chimiquement ou thermiquement, et suivis par spectrofluorimétrie; augmenté la stabilité d'ED3 par des changements de résidus dans son coeur hydrophobe sans affecter son antigénicité; et montré qu'un domaine ED3 consensus des virus de la dengue (DENV) était hautement stable. La Protéine Ribosomale SA (RPSA) humaine comprend un domaine N-terminal replié et un domaine C-terminal désordonné. Nous avons quantifié leurs interactions avec les domaines ED3 de Flavivirus pathogènes, la laminine, l'héparine et un anticancéreux (EGCG) par des méthodes immunochimiques et spectrofluorimétriques in vitro. J'ai montré que les domaines-N ,et -C avaient à la fois des fonctions idiosyncratiques et des fonctions partagées, et que le domaine-C mimait l'héparine. J'ai déterminé la spécificité de serotype des IgMs dirigées contre le domaine ED3 d'un des 4 sérotypes de DENV en utilisant des sérums humains infectés ou non-infectes par DENV et une analyse par courbe ROC (Receiving Operator Characteristic). Ces sérums ont été testées en MAC-ELISA au moyen des 4 sérotypes d'un hybride dimérique entre ED3 et phosphatase alcaline d'E. Coli. La discrimination par ED3 entre sérums infectés par le DENV homotypique et sérums non-infectes variait avec le serotype; elle était maximale pour ED3 de DENV1 quel que soit le serotype infectant. Certains domaines ED3 discriminaient entre sérotypes de DENV. Des applications potentielles sont considérées.

  • Titre traduit

    Engineering of the viral envelope protein and its domains for the detection of flavivirus infections and study of interactions with its receptors


  • Résumé

    The envelope protein of Flaviviruses includes 3 ectodomains and a membrane segment. I have characterized the properties of its domain III (ED3) in vitro. I measured the thermodynamic stability of ED3 by experiments of unfolding equilibria, chemically or thermically induced and monitored by spectrofluorimetry; increased the stability of ED3 by changes of residues in its hydrophobic core without affecting its antigenicity; and showed that an ED3 domain, consensus for all the dengue viruses (DENV), was highly stable. The human Ribosomal Protein SA (RPSA) includes a folded N-terminal domain and a disordered C-terminal domain. We quantified their interactions with the ED3 domains of pathogenic Flaviviruses, laminin, heparin and an anticarcinogen (EGCG) by immunochemical and spectrofluorimétrie methods in vitro. I showed that the N- and C-domains had both idiosyncratic and shared fonctions, and that the C-domain mimicked heparin. We determined the serotype specificity of IgMs that were directed to the ED3 domain of each serotype of DENV by using DENV-infected or -uninfected human serums and a statistical analysis by receiving operator characteristic (ROC) curves. These serums were tested in MAC-ELISA with the 4 serotypes of a dimeric hybrid between ED3 and E, coli alkaline phosphatase. The discrimination by ED3 between serums infected by the homotypic DENV and uninfected serums varied with the serotype; it was maximal with the ED3 from DENV1 whatever the infecting serotype. Some ED3 domains discriminated between sérotypes of DENV. Potential applications are described.

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  • Détails : 1 vol. (188 f.)
  • Annexes : 115 réf.

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  • Cote : TS (2013) 149
  • Bibliothèque : Institut Pasteur (Paris). Centre de Ressources en Information Scientifique (CeRIS) - Bibliothèque.
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