Caractérisation de la voie hippo et de ses effecteurs YAP et TAZ dans la pathologie du mélanome cutané

par Flore Nallet-staub

Thèse de doctorat en Bases fondamentales de l'oncogénèse

Sous la direction de Alain Mauviel.

Soutenue en 2012

à Paris 7 .


  • Résumé

    Les protéines paralogues YAP et TAZ sont les effecteurs de la voie Hippo chez les Mammifères. Elles sont connues pour favoriser la prolifération cellulaire et décrites eni ^ant qu'oncogènes dans de nombreux cancers. Peu de choses sont connues sur le statut de la voie Hippo dans la pathologie du mélanome cutané. Nous avons donc entrepris une vaste analyse de l'expression des membres de la voie Hippo dans des lignées cellulaires de mélanomes et des tumeurs de patients, puis caractérisé la capacité de YAP et TAZ à contrôler le comportement de cellules de mélanome. Les immunomarquages de YAP et TAZ ont révélé une localisation cytoplasmique et nucléaire des deux protéines aussi bien dans le naevus bénin que dans les lésions mélanocytaires humaines. Les PCR quantitatives et les analyses protéiques ont permis l'identification d'expressions variables des kinases de la voie Hippo et de leurs effecteurs dans un panel de lignées cellulaires de mélanome humain, indiquant une signalisation Hippo fonctionnelle. De plus, la répression stable de TAZ dans quatre lignées cellulaires de mélanome, réduit considérablement leur croissance indépendante de l'ancrage, leur capacité à envahir le Matrigel et le derme de peaux reconstruites in vitro, ainsi que l'expression du gène cible de la voie Hippo : le CTGF. Celle de YAP mène à des effets similaires, mais en moindre mesure. Inversement, la surexpression de YAP augmente le pouvoir invasif des cellules de mélanome, la transcription dépendante des facteurs de transcription TEADs et donc l'expression du CTGF. Ainsi, ces résultats indiquent que les effecteurs YAP et TAZ exercent tous les deux des activités oncogéniques dans les cellules de mélanome.

  • Titre traduit

    Characterization of the hippo pathway effectors yap and taz in cutaneous melanoma


  • Résumé

    YAP and its paralog protein TAZ are downstream effectors of the Hippo pathway in mammals. Both are amplified in many human cancers and promote cell proliferation and epithelial-mesenchymal transition. To date, little is known about the status of the Hippo pathway in cutaneous melanoma. Then, we undertook a broad analysis of Hippo pathway component expression in human melanoma cell lines and tumors, and! characterized the capacity of YAP and TAZ to control melanoma cell behavior. YAP and TAZ immunostaining revealed mixed cytoplasmic and nuclear staining for both proteins in benign nevi as well as in human melanoma samples. Variable expression of Hippo kinases LATS1/2 and MST1/2 and their effectors YAP1/2 and TAZ was found across a panel of human melanoma cell lines, irrespective of their BRAF mutation status. TAZ was the most predominantly expressed in ail cell lines. Western analysis revealed constitutive phosphorylation of LATS, MST, YAP and TAZ in several cell lines, indicating functional Hippo signaling. Stable knockdown of YAP or TAZ expression in four distinct |cell lines dramatically reduced the expression of CTGF, a classical Hippo target, as well |as anchorage-independent growth, and capacity to invade Matrigel and form lung! métastases in mice. YAP knockdown in 1205Lu cells also reduced invasion in a model of skin reconstruct. Inversely, YAP overexpression increased melanoma cell invasiveness, associated with increased TEAD-dependent transcription and CTGF expression. Together, these results indicate that both YAP and TAZ contribute to the invasive capacity in melanoma cells.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (221 p.)
  • Annexes : 370 réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2012) 202
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