Perte d'hétérozygotie et adaptabilité chez la levure pathogène Candida albicans

par Raphaël Loll-Krippleber

Thèse de doctorat en Microbiologie procaryote et eucaryote

Sous la direction de Marie-Elisabeth Bougnoux et de Mélanie Legrand.

Soutenue en 2012

à Paris 7 .


  • Résumé

    En réponse à un stress génotoxique, la levure pathogène Candida albicans est capable de subir une transition levure-filament et de larges réarrangements génomiques, en particulier des événements de perte d'hétérozygotie (LOH). Ce travail de thèse visait à évaluer la contribution du DNA damage checkpoint (DDCP) dans la morphogénèse et dans le contrôle des LOH. Une étude de mutagénèse dirigée a été réalisée sur CaRadSSp, un des régulateurs centraux du DDCP chez Saccharomyces cerevisiae, et a démontré que l'activité kinase de cette protéine ainsi que ses sites de phosphorylation N-terminaux étaient requis pour limiter les LOH, réguler le cycle cellulaire et promouvoir la filamentation en réponse à un stress génotoxique. L'étude de différentes formes phospho-mimétiques de CaRadSSp a permis de séparer ses fonctions dans la réparation de l'ADN, la régulation du cycle cellulaire et la résistance à HU de ses fonctions dans la transition levure-filament et la résistance au MMS. Ces résultats ont été confirmés en partie chez S. Cerevisiae. D'autre part, l'inactivation de CaDUNl, codant pour la cible principale de Rad53p, a révélé que CaDunl était uniquement requise pour prévenir l'apparition des LOH. Parallèlement à ce travail, un nouvel outil pour le suivi des LOH par cytométrie de flux a été développé. Après validation, ce système a été utilisé pour le criblage d'une collection de 139 souches de surexpression. Ce crible a identifié 7 gènes dont la surexpression conduit à une augmentation de la fréquence des LOH et constitue une preuve de principe pour son utilisation à l'échelle de l'ORFéome complet de C. Albicans qui est en cours de développement.

  • Titre traduit

    Loss of heterozygosity and adaptability in the pathogenic yeast Candida albicans


  • Résumé

    In response to genotoxic stress, the pathogenic yeast Candida albicans can undergo a yeast-to-filament switch and massive genome rearrangements such as loss-of-heterozygosity (LOH) events. This thesis work aimed at evaluating the contribution of the DNA damage checkpoint (DDCP) in filamentation and LOH control. A site directed mutagenesis approach was performed on CaRadSSp, one of the central regulator of DDCP in Saccharomyces cerevisiae, and demonstrated that the kinase activity and amino-terminal CaMeclp-dependent phosphorylation sites were required for genome integrity maintenance, cell cycle regulation and filamentation. Interestingly, phospho-mimic mutations on CaMeclp-dependent phosphorylation sites of CaRadSSp revealed an unexpected uncoupling of its functions in DNA repair, replication arrest and HU résistance versus its functions in MMS résistance and morphogenesis. Indeed, phospho-mimicking mutations at thé N-terminus of CaRadSSp increased LOH rates and HU sensitivity only, whereas similar mutations in the central part of CaRadSSp enhanced MMS sensitivity and impaired genotoxic stress-induced filamentation. These results were partly confirmed in S. Cerevisiae. In addition, inactivation of C. Albicans Dunlp, a main target of RadSSp, revealed a role only in genome stability. In parallel, a new tool for detecting LOH using flow-cytometry was developed. After validation, this System was used to screen a collection of 139 overexpression strains. The screen allowed the identification of 7 genes whose overexpression triggers an LOH increase and constitutes a proof of principle for its application to the entire C. Albicans ORFeome that the lab is currently developing.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 1 vol. (183 f.)
  • Annexes : 234 Réf.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2012) 183
  • Bibliothèque : Institut Pasteur (Paris). Centre de Ressources en Information Scientifique (CeRIS) - Bibliothèque.
  • Non disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Institut Pasteur (Paris). Centre de Ressources en Information Scientifique (CeRIS) - Bibliothèque.
  • Non disponible pour le PEB
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.