Caractérisation de protéines bovines potentiellement impliquées dans la reproduction : GPA2, GPB5, PDI, PEBP et Ubiquitine

par Maya Haj Hassan

Thèse de doctorat en Sciences de la vie, spécialité Biologie de la reproduction

Sous la direction de Yves Combarnous.

Soutenue le 13-12-2011

à Tours , dans le cadre de Ecole doctorale Santé, sciences, technologies (Tours) , en partenariat avec SST/UMR CNRS INRA 6175 -Physiologie de la Reproduction et des Comportements (équipe de recherche) .

Le président du jury était Anne Duittoz.

Le jury était composé de Sylvie Dufour.

Les rapporteurs étaient Bruno Querat, Florence Legac.


  • Résumé

    Nous avons caractérisé cinq protéines bovines qui sont potentiellement impliquées dans la reproduction.Un travail de clonage a été initié qui permettra à terme de purifier les GPA2 et GPB5 recombinantes puis naturelles pour étudier leurs structures. GPA2 et GPB5 sont considérés comme les ancêtres moléculaires des sous-unités α et β des hormones glycoprotéiques. Nous avons montré la relative fragilité thermique de la structure quaternaire de la FSH bovine par rapport aux FSH ovine et humaine et nous avons étudié les propriétés enzymatiques de la PDI (Protein Disulfide Isomerase) en préalable à l’étude de l’activité PDI de GPA2/GPB5. Nous avons aussi purifié la phosphatidyl-ethanolamine-binding protein (PEBP) et l’ubiquitine testiculaires par chromatographie hydrophobe à très haute concentration de sulfate d’ammonium. A partir de la PEBP purifiée, on a produit des anticorps spécifiques chez le lapin qui nous ont permis d’être les premiers à développer un dosage ELISA fiable pour cette protéine.

  • Titre traduit

    Characterization of bovine proteins potentially involved in reproduction : GPA2, GPB5, PDI, PEBP et Ubiquitin


  • Résumé

    We characterized five bovine proteins that are potentially involved in reproduction. We started with the cloning of gpa2 and gpb5 cDNAs in order to eventually purify recombinant and natural GPA2 and GPB5 to study their possible quaternary structure. GPA2 and GPB5 are the evolutionary ancestors of Glycoprotein hormones α and β subunits respectively. Meanwhile, we have shown the relative quaternary structure fragility of bovine FSH compared to human and sheep FSH. We also studied the effect of endocrine disruptors on PDI (Protein Disulfide Isomerase) before addressing GPA2/GPB5 PDI activity of GPA2/GPB5 once purified.We succeeded to purify the phosphatidyl-ethanolamine-binding protein (PEBP) and ubiquitin from bovine testis by hydrophobic interaction chromatography at very high ammonium sulfate concentration and we produced specific antibodies (anti-PEBP) in rabbits that allowed us to be the first to develop a reliable Elisa assay for this protein.


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