Régulation de la transcription par l'activité de sécrétion chez Shigella flexneri

par Clotilde Bongrand

Thèse de doctorat en Microbiologie procaryote et eucaryote

Sous la direction de Claude Parsot.

Soutenue en 2011

à Paris 7 .


  • Résumé

    Le système de sécrétion de type III de Shigella flexneri, bactérie responsable de la dysenterie bacillaire chez l'homme, est activé au contact des cellules hôtes, conduisant à la transcription des gènes codant certains effecteurs. Cette régulation implique des interactions entre un activateur transcriptionnel de la familte AraC (MxiE), un co-activateur (IpgC), deux anti-co-activateurs (IpaB et IpaC), un anti-activateur (OspDl) et un co-anti-activateur (SpalS). En condition de non sécrétion, MxiE est associé à OspDl:Spal5 et IpgC est associé séparément à IpaB et IpaC. La sécrétion de OspDl, IpaB et IpaC permet à MxiE et IpgC d'interagir pour activer la transcription des gènes cibles. Pour étudier les interactions impliquant MxiE et ses partenaires protéiques, nous avons construit des plasmides codant pour MxiE (en entier ou par domaine) fusionné à la Maltose Binding Protein et OspDl ou IpgC fusionnés à une étiquette poly-His. Des résultats de co-purification ont montré que chaque domaine de MxiE peut interagir avec IpgC et OspDl. L'état agrégé de MxiE, documenté par des études de tamisage moléculaire et de diffusion de la lumière, ne nous a pas permis de déterminer la stœchiométrie de ces complexes. Pour l'étude des régions promotrices, de la boîte MxiE et des régions 5' non traduites (5'UTR), nous avons construit des plasmides dans lesquels le gène rapporteur lacZ était sous le contrôle de ces éléments. Le dosage de l'activité β-galactosidase, en condition de sécrétion ou non, a permis de mesurer la force des promoteurs, de caractériser les nucléotides essentiels à leur activation et d'identifier des structures secondaires stabilisatrices dans certaines 5'UTR.

  • Titre traduit

    Transcription regulation by secretion activity in Shigellaflexneri


  • Résumé

    The type III secretion System of Shigella flexneri, the bacterium responsible for bacillary dysentery in human, is activated upon contact with host cells, inducing transcription of some effector-ehcoding genes. This régulation involves interactions between an AraC family transcriptional activator (MxiE), a co-activator (IpgC), two anti-co-activators (IpaB and IpaC), an anti-activator (OspDl) and a co-anti-activator (SpalS). In condition ofnon-secretion, MxiE is associated with OspD:Spal5 and IpgC is associated independently with IpaB and IpaC. The sécrétion of OspDl, IpaB and IpaC allows MxiE and IpgC to interact and activate transcription oftarget genes. To study of interactions involving MxiE and its partners, we constructed plasmids encoding MxïE(full-length or each domain) fused to the Maltose Binding Protein and OspDl or IpgC fused to, a poly-His tag. Co-purification experiments showed that each domain of MxiE can interact with IpgC and OspDl. Aggregation of MxiE was documented by gel filtration and static or dynamic Hght scattering studies and did not allow us to détermine the stoichiometry of these complexes. For the study of the target promoter regions, the MxiE box and 5' untranslated regions (5'UTR), we constructed plasmids in which the reporter gene lacZ was under the control of these elements. Determination of β-galactosidase activity, in condition of secretion or not, allowed us to measure the strength of different promoters, to determined nucleotides essential for their activation and to identify stabilizing secondary structures in some 5'UTR.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (191 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 393 Réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2011) 084
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 8122
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