Approches structurales de la protéine translocatrice TSPO par microscopie électronique

par David Teboul

Thèse de doctorat en Biophysique

Sous la direction de Jean-Jacques Lacapère.

Soutenue en 2011

à Paris 6 .


  • Résumé

    La protéine translocatrice TSPO exprimée dans la membrane mitochondriale externe des eucaryotes y importe le cholestérol comme précurseur des stéroïdes et sels biliaires. Notre projet consiste à déterminer sa structure par cristallisation en membrane et analyse par microscopie électronique. La cristallogenèse vise à favoriser les interactions interprotéiques dans une bicouche. Partant d’une protéine solubilisée en détergent en présence de lipides, le détergent est éliminé et de nombreuses conditions ont été testées pour obtenir des cristaux. Lors de l’optimisation des paramètres de cristallisation en solution (ratio lipides/protéine, conditions physicochimiques…) seuls des protéoliposomes non cristallins de plusieurs centaines de nanomètres, riches en TSPO, ont été observés. Une nouvelle approche de cristallisation sous une mononocouche lipidique fonctionnalisée a été tentée. Vu que la présence de détergents déstabilise les monocouches, des lipides fluorés moins sensibles aux détergents ont été testés. Des mesures de tension de surface, d’ellipsométrie et de microscopie à l’angle de Brewster ont permis le suivi des effets des détergents, de l’adsorption de la TSPO et des lipides. Des images de la TSPO liée à une monocouche de lipides carbonés montre des objets circulaires et creux au centre. Leur analyse en particules isolées a donné deux formes moyennes, mais la résolution actuelle ne permet pas de déterminer s’il s’agit de conformations ou d’orientations différentes de la protéine en membrane. Les perspectives d’obtention d’une structure de la TSPO par cristallisation bidimentionnelle sont discutées (orthologues, ligands, cocristallisation)

  • Titre traduit

    Structural approaches of translocator protein TSPO by electron microscopy


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Informations

  • Détails : 1 vol. ([158] p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 120-128. 134 réf. bibliogr.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Consultable sur place dans l'établissement demandeur
  • Cote : T Paris 6 2011 733
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 2011 733
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