Vecteurs lentiviraux optimisés pour le transfert de gène intra-thymique

par Isabelle Ragon

Thèse de doctorat en Physiologie et Physiopathologie

Sous la direction de David Klatzmann.

Soutenue en 2011

à Paris 6 .


  • Résumé

    Notre projet cherche à rendre les vecteurs lentiviraux plus sûrs pour une utilisation en thérapie génique. Notre modèle de travail est un variant de déficit immunitaire combiné sévère (DICS), ZAP-70. Un vecteur lentiviral exprimant ZAP-70 sous l’influence d’un enhancer/promoteur minimal du CD4 humain (sCD4) a été développé au sein du laboratoire. Il a prouvé sa fonctionnalité dans le cadre d’injection intra-thymique dans des souris ZAP-70-/- qui ont développé un système immunitaire fonctionnel. Un bon vecteur de thérapie génique doit s’efforcer d’avoir un bon niveau d’expression, de s’exprimer dans les bonnes cellules et de ne pas déclencher d’effets délétères. Pour atteindre ces différents objectifs nous avons apporté plusieurs modifications à notre vecteur initial. Nous avons remplacé CD4s par la totalité du promoteur CD4 humain associé à trois copies de l’enhancer murin. Dans un même temps l’importance du WPRE pour l’obtention un bon niveau d’expression a été examiné. Par la suite, nous avons transféré notre cassette d’expression dans un backbone contenant des insulateurs. L’étude de ces vecteurs a fait ressortir différents points: (a) la présence du WPRE n’est pas nécessaire pour obtenir un niveau d’expression correct, (b) la présence d’insulateurs permet une extinction d’expression dans une lignée cellulaire non cible (c) Les versions longue et courte du CD4 ont un niveau d’expression équivalent après infection de cellules cibles. De plus, ce vecteur exprimant une casette exprimant ZAP-70 a permis la reconstitution de souris déficientes en ZAP-70, démontrant que les différentes modifications apportées au vecteur n’ont pas perturbé sa fonctionnalité ni son efficacité

  • Titre traduit

    Improved lentiviral vectors for intrathymic gene transfer application


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Informations

  • Détails : 1 vol. (144 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 130-144. 265 réf. bibliogr. index

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Consultable sur place dans l'établissement demandeur
  • Cote : T Paris 6 2011 729
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 2011 729
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