Impact de la cryoconservation sur l'intégrité structurale et le développement du tissu testiculaire de souris prépubères

par Jean-Pierre Milazzo

Thèse de doctorat en Biologie : biologie de la reproduction

Sous la direction de Nathalie Rives.

Soutenue en 2010

à Rouen .


  • Résumé

    La fertilité de garçons prépubères soumis à un traitement fortement gonadotoxique pourrait être préservée en ayant recours à une biopsie de tissu testiculaire en vue d'une transplantation autologue après guérison. Une telle stratégie n'est toutefois envisageable que si l'on dispose d'un protocole de cryoconservation permettant de préserver de façon satisfaisante l'intégrité structurale et fonctionnelle des tissus prélevés. Nous avons développé un modèle murin de congélation de tissu testiculaire immature. Nos travaux ont permis de démontrer que l'évaluation de l'intégrité structurale du tissu testiculaire et de la survie des cellules germinales après décongélation permettaient d'identifier rapidement les conditions de congélation les plus favorables. Différents paramètres tels que la nature du cryoprotecteur utilisé, sa concentration, le temps et la température d'équilibration du tissu avec le milieu de congélation ou le type de descente en température ont été évalués. Une préservation optimale du tissu a été obtenue en utilisant du DMS01,5M, un temps d'équilibration de 15 minutes et une descente en température contrôlée lente sans seeding. Ce protocole a ensuite été validé par une évaluation de l'intégrité fonctionnelle du tissu cryoconservé après 9 jours de culture organotypique, ou 4 à 5 mois de maturation in vivo sur le dos de souris ayant reçu une allogreffe. Après maturation in vitro, la prolifération cellulaire, la croissance des tubes séminifères, l'activité hormonale des cellules de Leydig et la différenciation de cellules germinales étaient comparables à celles du tissu frais. Pour ce qui est des tissus greffés, des taux de différenciation des cellules germinales comparables à ceux observés pour le tissu non congelé ont été obtenus. Des spermatozoïdes ont ainsi pu être produits après allogreffe de tissu immature cryonconservé. Les conditions optimales définies chez la souris ont ensuite été utilisées afin de préserver des fragments de tissu testiculaire provenant de patients suivis au sein de notre équipe. Une analyse histologique des prélèvements a été effectuée avant et après cryoconservation. La maladie et ou les traitements antérieurs semblent avoir un effet délétère plus marqué sur les tissus provenant des patients les plus âgés (entre 11 et 16 ans). Pour ces patients, une absence totale de différenciation des cellules germinales s'accompagne également d'une diminution de leur nombre, associée dans certains cas à un ralentissement de la croissance des tubes et à une fibrose péritubulaire et de l'espace interstitiel. La cryoconservation entraîne une faible augmentation des altérations morphologiques affectant les tubes séminifères. Plus de 75% d'entre eux demeurent intacts, même si l'on observe une diminution moyenne de leur taille de l'ordre de 11%. La maladie, les traitements et la cryoconservation peuvent ainsi être à l'origine d'altérations structurales du tissu testiculaire humain immature. Il conviendra, lorsque des cellules germinales sont présentes, d'en mesurer l'impact sur son intégrité fonctionnelle après maturation in vitro ou xénogreffe avant d'envisager une utilisation dans le cadre d'une application clinique. De nouveaux paramètres de congélation devront être évalués, chez l'animal, afin d'optimiser le protocole existant.


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Informations

  • Détails : 1 vol. (247 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. . Contient des articles en anglais.

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  • Bibliothèque : Université de Rouen. Service commun de la documentation. BU Santé.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : THD 10.07
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