Etude de la régulation du facteur de transcription P-TEFb par la protéine HEXIM1 et l'ARN non codant 7SK

par Gaëlle Diribarne

Thèse de doctorat en Biologie moléculaire de la cellule

Sous la direction de Olivier Bensaude.

Soutenue en 2010

à Paris 7 .


  • Résumé

    Le P-TEFb est un facteur positif de Mongation de la transcription par TARN polymérase IL C'est à ce jour le seul complexe cycline-CDK (Cycline T-CDK9) régulé par un ARN non codant. Le P-TEFb existe sous deux formes en équilibre dans la cellule : une petite forme active et une grande forme inactive, qui comprend en plus du P-TEFb, la protéine HEXIM et TARN non codant 7SK. Le 7SK modifierait la conformation de HEXIM et démasquerait son domaine d'interaction avec la Cycline T. Différents stimuli, comme une inhibition de la transcription, conduisent à la dissociation du grand complexe P-TEFb. Nous avons mis en évidence une nouvelle zone de contact direct entre HEXIM et la Cycline T par mutagenèse. L'interaction entre HEXIM et le P-TEFb existe bien dans les cellules. Elle est en effet détectable par des expériences de FRET et de couplage covalent. Ces expériences indiquent surtout l'existence d'un complexe, non décrit précédemment, entre HEXIM et le P-TEFb, qui se maintient lors d'un arrêt de la transcription. Par ailleurs, nous avons montré le recrutement des partenaires inhibiteurs du P-TEFb, HEXIM et 7SK, sur des sites de transcription, par des techniques de microscopie et des immunoprécipitations de la chromatine. HEXIM et 7SK pourraient ainsi contrôler l'activation spatiotemporelle du P-TEFb sur les sites de transcription.

  • Titre traduit

    Study of the regulation of the positive transcriptional elongation factor, P-TEFb, by the HEXM1 protein and the 7SK non coding RNA


  • Résumé

    P-TEFb is a positive elongation factor for RNA polymerase II transcription. It is a unique example of a CDK-cyclin complex (CDK9-Cyclin T) regulated by a non-coding RNA. P-TEFb exists under two forms in equilibrium in the cell: a small active one, and a large inactive one, also containing the HEXIM protein and the 7SK non coding RNA. 7SK would change HEXIM conformation and unmask its domain of interaction with the cyclin subunit of P-TEFb. Many stimuli, as transcription inhibition, result in the dissociation of the large inactive P-TEFb complex. We characterized a new domain of HEXIM implicated in its direct contact with Cyclin T by mutagenesis. HEXIM and P-TEFb interact in the cell, as confirmed by FRET and crosslinking experiments. These experiments mainly showed a new HEXIM/P-TEFb complex, which resists to transcriptional arrest. We also demonstrate the recruitment of P-TEFb inhibitory partners, HEXIM and 7SK, on transcription sites, by microscopy and chromatin immunoprecipitation experiments. HEXIM and 7SK would thus control the spatio-temporal activation of P-TEFb on transcription sites.

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