Fonction de la molécule d'adhérence Lu/BCAM, récepteur de la chaine α5 de la laminine dans les cellules épithéliales rénales MDCK : régulation par interaction avec les protéines Ubc9 et spectrine

par Emmanuel Collec

Thèse de doctorat en Génomes et protéines

Sous la direction de Caroline Le Van Kim.

Soutenue en 2010

à Paris 7 .


  • Résumé

    Lu/BCAM est une molécule d'adhérence, récepteur de la laminine 511/521 dans les cellules érythroïdes, endothéliales ainsi que dans les tissus épithéliaux. Elle lie la spectrine dans les globules rouges. La lysine 585 présente dans son domaine cytoplasmique, interagit avec l'enzyme Ubc9 dans les cellules épithéliales rénales. Ubc9 forme un complexe avec Lu/BCAM endogène ou recombinant dans les cellules épithéliales A498 et MDCK respectivement. Les cellules MDCK transfectées avec un mutant de Lu/BCAM incapable de lier Ubc9, montrent une localisation membranaire basolatérale, une demi-vie membranaire augmentée et une adhérence et un étalement à la laminine renforcée. La spectrine-all forme un complexe avec Lu/BCAM endogène ou recombinant dans les cellules épithéliales A498 et MDCK, respectivement. Le mutants mt-Lu indique que l'absence d'interaction avec la spectrine conduit à un affaiblissement de l'interaction avec le squelette dépendant de la spectrine, comme le montre l'augmentation de son extractabilité au Triton X-100. Les cellules MDCK transfectées avec mt-Lu, incapable de lier la spectrine, montrent une localisation membranaire basolatérale, une demi-vie à la membrane augmentée et une, adhérence "et un étalement significativement renforcée à la laminine qui n'est pas corrélée à l'état de phosphorylation de Lu/BCAM. Nous montrons pour la première fois, que cette interaction est impliquée dans une signalisation allant de la laminine à Tactine conduisant à la formation de fibres de stress dans les cellules cultivées sur laminine. Ce signal est associé à l'activation de la petite GTPase RhoA qui est dépendante de l'intégrité du motif d'interaction de Lu/BCAM la laminine.

  • Titre traduit

    Function of Lu/BCAM adhesion molecule, receptor of laminin a5 chain in kidney epithelial MDCK cells : regulation by interaction with Ubc9 and spectrin proteins


  • Résumé

    Lu/BCAM is an adhésion molecule, receptor of laminin 511/521 in erythroïd cells as well as in epithelial tissues and endothelial cells. Lu/BCAM binds also directly to al spectrin in red blood cells. The lysine 585 present in its cytoplasmic domain interacts directly with the enzyme Ubc9 in renal epithelial MDCK cells. Ubc9 forms a complex with endogenous or recombinant Lu/BCAM in epithelial MDCK and A498 cells respectively. MDCK cells transfected with a mutant of Lu/BCAM, unable to bind Ubc9, showed a basolateral membrane localization, greater extended half-life at the membrane and enhanced adhesion and spreading on laminin. The all-spectrin forms a complex with endogenous or recombinant Lu/BCAM in epithelial MDCK and A498 cells respectively. The mutant mt-Lu indicates that the lack of interaction with all-spectrin leads to a weakening of the interaction with the cell membrane cytoskeleton of non-erythroïd cells, as shown by the increase in its extractability with Triton X-100. MDCK cells transfected with a Lu/BCAM mutant unable to bind spectrin (mt-Lu) exhibited a normal basolateral expression but enhanced half-life at the membrane. In addition, adhesion and spreading of epithelial MDCK cells on laminin were significantly reinforced in the mt-Lu and this is not related to the phosphorylation status of Lu/BCAM. We show for the first time that this interaction is involved in signaling from laminin to actin leading to the formation of stress fîbers in cells growning on laminin. This rearrangement of the actin skeleton is associated with an activation of the small GTP specifîcally -binding protein RhoA that is dependant to the laminin binding site integrity of the Lu/BCAM.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (237 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 370 réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2010) 059
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 7902
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