Contrôle de l'expression du régulateur central AtxA chez Bacillus anthracis

par Marine Bertin

Thèse de doctorat en Microbiologie

Sous la direction de Agnès Fouet.

Soutenue en 2010

à Paris 7 .


  • Résumé

    Bacillus anthracis, l'agent Biologique de la maladie du charbon, est. Une bactérie à Grain positif sporulante. Les facteurs majeurs de virulence sont une toxine tripartite immunomodulatriçe et une capsule antiphagocytaire. L'expression des gènes de chacun de ces deux facteurs de virulence est sous le contrôle du régulateur central AtxA. Les mécanismes exacts permettant à AtxA d'activer la transcription des gènes des composants de la toxine ne sont pas connus,Par un jeu de délétion, nous avons mis en évidence que l'expression d'atxA est régulée par des éléments agissant e. N cis du gène. Les régions d'ADTsl en amont et en aval d'afr/it sont nécessaires à l'expression optimale d'atx4 et en conséquence des gènes de la toxine, En amont se trouve, décrit entre temps par une autre équipe, un deuxième promoteur. Une copie d'atxA délétée juste après le codon stop est responsable d'un défaut d'expression-. -d'atxA, Cette délation-n'est pas complémentaire par l'apport du fragment en tram sur un plasmide multi-copie. Elle entraîne une déstabilisation du transcrit. L'ARNm d'atxA présente une région 3'UTR de 520 bases contenant une structure en tige et boucle suivie d'un poly-U à son extrémité. Cette région 3'UTR exercerait un rétrocontrôle. Responsable de la stabilisation de l'ARNm d'atxA. L'analyse de l'ARNm d'atxA par RT-PCR montre que l'ARNm"se termine dans la région de la tige et boucle. Nous avons confirmé que la structure en tige et boucle de la région 3'UTR du transcrit atxA est un terminateur, La séquence d'atxA, clonée avec ses régions 5'UTR et 3'UTR, est suffisante à une expression maximale de pagA en absence de tout autre élément de pXOl.

  • Titre traduit

    Expression of the Bacillus anthracis global, regulator AtxA


  • Résumé

    Bacillus anthracis, the ethiological agent of anthrax, is a Gram positive spore forming bacterium. After entry into the mammalian host the bacilli multiply and produce key virulence factors, an immunomodulating tripartite toxin and an antiphagocytic poly-y-D-glutamate capsule, Genes responsible for synthesis of the key virulence factors are under AtxA contrai» a global transcriptional regulator. Toxin gene expression has been investigated but the mechanism by which is still undefined. With a set of deleted strains, we have determined that in cis elements located in the vicinity of atxA act on this gene expression. Regions located both upstream and downstream atxA are roquired for full expression of the gene, Upstream of atxA, a second promoter located before the initially identified promoter has been described by another team. An atxA copy deleted just after the translation stop codon gene is responsible for a defect m atxA and pagA expression and this phenotype is not restored by an in trans complementation of the deleted part. The truncated atxA gene produces an instable mRNA. We have determined that the atxA 3'UTR region of 520 bases ends with a rho-independent terminator. We hypothesized that the stem and loop structure is necessary for protection of the transcript against 3'-5' exoribonucleases. The stem end loop structure acts as a transcriptional repressor when inserted between an inducible promoter and a reporter gene. We have shown that the atxA gene, as now defined with a long 5'UTR, containing the described promoters, and the 3'UTR region, containing a stem, and loop follow by poly-T, is the only pXQl element required for pagA gene optimal expression.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (78-36 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 134 Réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2010) 029
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