Aptamères et électrophorèse capillaire : caractérisation physico-chimique d'aptamères libres en solution ou greffés sur des nanoparticules, et étude de leur affinité avec une cible protéique en vue de leur emploi pour des méthodes sensibles de diagnostic

par Marie Girardot

Thèse de doctorat en Chimie analytique

Sous la direction de Anne Varenne.

Soutenue en 2010

à Paris 6 .


  • Résumé

    Les aptamères sont de courts oligonucléotides sélectionnés par le procédé SELEX, présentant une affinité et une spécificité élevée pour leur cible. Ce travail porte sur la caractérisation physico-chimique d’aptamères et l’étude de leur affinité avec leur cible, par électrophorèse capillaire, à travers l’exemple d’un aptamère dirigé contre une cible protéique fortement basique, le lysozyme. Après évaluation de différents traitements de surface du capillaire, la modification permanente par l’hydroxypropylcellulose a été retenue afin de limiter l’adsorption protéique tout en restant compatible avec l’analyse de l’aptamère. Le comportement électrophorétique de l’aptamère en présence de différents cations en solution a ensuite été étudié par électrophorèse capillaire d’affinité (ACE), mettant en évidence dans le cas d’un dication une interaction significative pouvant induire un changement de conformation de l’aptamère, et donc susceptible d’influer sur l’interaction avec la cible. Le développement d’une méthode d’analyse frontale électrocinétique en microsystème (FACMCE) avec détection de fluorescence a permis de déterminer les paramètres de l’interaction aptamère-lysozyme, ainsi que l’influence des conditions expérimentales sur l’affinité. Enfin, des nanoparticules magnétiques fluorescentes cœur/coquille ont été fonctionnalisées par l’aptamère puis caractérisées par électrophorèse capillaire de zone (CZE). L’étude par FACMCE de l’interaction entre l’aptamère greffé et le lysozyme a montré une affinité similaire à celle de l’aptamère libre, permettant ainsi d’envisager l’utilisation future de ces objets comme outils de bio-reconnaissance moléculaire

  • Titre traduit

    Aptamers and capillary electrophoresis : physicochemical characterization of free aptamers in solution or grafted on nanoparticles, and study of their affinity towards a proteic target in view of their use as sensitive diagnostic methods


  • Pas de résumé disponible.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 2 vol. (361 p.)
  • Annexes : Bibliogr. en fin de chapitres. 577 réf. bibliogr.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Consultable sur place dans l'établissement demandeur
  • Cote : T Paris 6 2010 573
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.