Caractérisation de la fonction de la protéine Phactr-1 dans le processus angiogénique

par Barbara Allain

Thèse de doctorat en Pharmacie

Sous la direction de Françoise Raynaud.

Soutenue en 2010

à Paris 5 , en partenariat avec Université Paris Descartes. Faculté de pharmacie de Paris (autre partenaire) .


  • Résumé

    L’angiogenèse est un phénomène impliqué dans la formation de nouveaux vaisseaux sanguins à partir de vaisseaux préexistants. Ce processus accompagne le développement de l’organisme au cours de la période embryonnaire. En revanche, à l’âge adulte ce processus est restreint à quelques situations physiologiques particulières (cycle menstruel, grossesse…). Sa dérégulation engendre de nombreuses pathologies comme la Dégénérescence Maculaire Liée à l’Age (DMLA), le diabète, l’ischémie tissulaire et le cancer. Au niveau moléculaire, l’angiogenèse est régulée par un équilibre entre des facteurs pro- et anti-angiogéniques. Parmi les facteurs pro-angiogéniques, le VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor) est un facteur de croissance de l’endothélium vasculaire. Les activités biologiques du VEGF sont transmises par des récepteurs membranaires à activité tyrosine kinase tels que: VEGFR-1 (VEGF Receptor-1), VEGFR-2 et VEGFR-3, exprimés à la surface des cellules endothéliales et tumorales. Plus récemment, deux autres récepteurs du VEGF ont été identifiés, les neuropilines-1 et -2 (NP-1 et NP-2). Ces dernières, dépourvues d’activité tyrosine kinase sont connues initialement pour leur rôle dans le guidage axonal. Des données récentes semblent indiquer que la NP-1 renforcerait la signalisation du VEGFR-1 et du VEGFR-2. Moduler l’angiogenèse semble être une stratégie thérapeutique prometteuse dans les pathologies ischémiques, oculaires et tumorales. A l’heure actuelle, la stratégie thérapeutique anti-angiogénique est axée sur le complexe VEGF/VEGFR, comme le Bevacizumab (Avastin ®, Roche Ltd), le Sunitinib (Sutent ®, Pfizer Ltd) ou encore le Sorafenib (Nevaxar ®, Bayer Ltd). Cependant, leur efficacité est encore insuffisante. Nous avons donc recherché de nouvelles protéines clefs impliquées au cours de la régulation de l’angiogenèse, en aval de la signalisation VEGF/VEGFR et qui pourraient servir de nouvelles cibles thérapeutiques. Ainsi, nous avons pu mettre en évidence par criblage différentiel SSH (Suppression Subtractive Hybridization) un gène codant pour la protéine Phactr-1 (Phosphatase-1 and ACtin Regulating Protein) dont l’expression est induite par le VEGF-A165 dans les cellules endothéliales, ce dernier pouvant constituer une cible potentielle thérapeutique. Phactr-1 fait partie d’une famille de protéines régulatrices des phosphatases et de l’actine composée de quatre membres (Phactr-1 à -4) jusqu’à présent identifiés dans le système nerveux central. Nous avons, de la sorte, cherché à élucider l’implication de la protéine Phactr-1 dans la régulation de l’angiogenèse in vitro. Nous démontrons que contrairement au VEGFR-2, les récepteurs VEGFR-1 et NP-1 sont impliqués dans l’induction de l’expression de l’ARNm Phactr-1 en réponse au VEGF-A165 dans les cellules HUVEC (Human Umbilical Vein Endothelial Cell). En effet, l’utilisation de siRNA (small interfering RNA) dirigés contre les VEGFR ainsi que des peptides inhibiteurs de la liaison du VEGF sur ses récepteurs et co-récepteurs valident ces résultats. L’utilisation d’un siRNA permet de montrer que la mise sous silence de Phactr-1 conduit à l’altération de la formation et de l’organisation des cellules endothéliales en tubules in vitro. De plus, cette mise sous silence de Phactr-1 dérégule la polymérisation/dépolymérisation de l’actine en réponse au VEGF-A165 dans les cellules HUVEC, la dynamique du lamellipode et inhibe l’activité enzymatique de PP-1 (Protéine Phosphatase-1). Par ailleurs, en présence de ce siRNA, les cellules HUVEC entrent en apoptose par activation de la voie dite extrinsèque, impliquant les récepteurs de mort de type DR4 (Death Receptor 4), DR5 et FAS (Apoptosis Stimulating Fragment)

  • Titre traduit

    Caracterization of Phactr-1 protein function in angiogenesis process


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Informations

  • Détails : 1 vol. (206 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 179-206

Où se trouve cette thèse\u00a0?

  • Bibliothèque : Université Paris Cité - Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TPHB 11542
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