Traitement du glaucome : modèles expérimentaux toxicologiques et application à l'étude des combinaisons fixes in vitro et in vivo

par Chadi Jean Mehanna

Thèse de doctorat en Pharmacie. Toxicologie

Sous la direction de Christophe Baudouin.


  • Résumé

    Le glaucome est une neuropathie optique progressive aboutissant à la cécité et dont le principal facteur de risque est l’hypertonie intraoculaire. Son traitement médical consiste à diminuer la production de l’humeur aqueuse ou à augmenter son drainage. Les collyres administrés par voie topique induisent des effets secondaires au niveau de la surface oculaire, en particulier au niveau du film lacrymal, principalement à cause du chlorure de benzalkonium. Une culture primaire de mucocytes conjonctivaux, principal élément produisant la couche mucinique du film lacrymal, permettrait d'étudier les effets des collyres sur ces cellules et les mécanismes induisant les effets toxiques. Dans le présent travail, nous avons réussi à obtenir des nodules de mucocytes à partir d’explants de conjonctives de rats. Des travaux supplémentaires sont nécessaires afin de pouvoir isoler les mucocytes des autres populations présentes dans le milieu et afin de maintenir la prolifération cellulaire après ablation des explants. Un autre modèle expérimental a permis de confirmer in vitro l’importante toxicité des associations non fixes par rapport aux combinaisons fixes. Un effet cytoprotecteur a été retrouvé pour le timolol et la brimonidine associée à l’alcool polyvinylique. Nous avons également amélioré le modèle d’analyse de la cytotoxicité in vitro en appliquant le double marquage à la technique de spectrophotométrie fluorescente en microplaques, le but étant d’avoir des résultats plus rigoureux et de faire une analyse multiparamétrique. Enfin, nous avons étudié la toxicité des collyres sur la surface oculaire de l’animal en utilisant la microscopie confocale in vivo, de même que nous avons essayé de retrouver les effets cytoprotecteurs de certains produits. Des travaux supplémentaires sont toutefois nécessaires. Tous ces modèles sont importants pour l’étude collyres antiglaucomateux et pour diminuer leur toxicité afin d’augmenter la compliance des patients

  • Titre traduit

    Glaucoma treatment : Toxicological models and application to the study of fixed combinations in vitro and in vivo


  • Résumé

    Glaucoma is a progressive optic neuropathy leading to blindness and caused by ocular hypertension. Its medical treatment is based on the reduction of aqueous humor production or on the acceleration of its drainage. Eye drops are instilled topically and induce undesired effects on the ocular surface, particularly on the tear film, mainly because of benzalkonium chloride. Conjunctival goblet cells are the major cells responsible of the production of the tear film mucin layer, and a primary culture of these cells would be useful for the study of eye drop toxic effects on these cells and the underlying mechanisms. In the present work, goblet cell nodules were obtained from cultured rat conjunctival explants. Further work is needed to isolate goblet cells from the other cell populations present in the culture and to maintain cell proliferation after explant withdrawal. In another in vitro experimental model, we confirmed the important citoxicity of non fixed associations compared to the fixed combinations. A cytoprotective effect was found with timolol and brimonidine with polyvinyl alcohol. We also improved the model we use in cytotoxicity study in vitro by using a double staining with microplate fluorescent spectrophotometry. Our goal was to get more accurate results and to perform a multiparametric analysis. Finally, we used in vivo confocal microscopy to study eye drop cytotoxic effects on animal ocular surface and to confirm the cytoprotective effects of some products. Further work is however needed. All these models are important for the évaluation of antiglaucomatous eye drops and for the reduction of their toxicity in order to increase patient compliance.

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  • Détails : 1 vol. (123 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 112-123

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