La voie Hedgehog : déchiffrer l'importance des événements de phosphorylation au cours de la transduction du signal

par Nadia Ranieri

Thèse de doctorat en Interactions cellulaires et moléculaires

Sous la direction de Pascal Therond.

Soutenue en 2010

à Nice .


  • Résumé

    Hedgehog (Hh) est une protéine sécrétée qui contrôle la croissance et la différenciation cellulaire chez les vertébrés et les invertébrés. Les cellules qui reçoivent le signal Hh, active une cascade d'événements intracellulaires caractérisée principalement par des modifications post-traductionnelles, telles que les phosphorylations, qui sont responsables de l’état actif/inactif de ces composants. Par conséquent, ces modifications ont un rôle central et important pour la transduction correcte de la voie. Chez la Drosophile, la transduction du signal Hh implique un complexe cytoplasmique composé par la kinésine Costal2 (Cos2), la kinase Fused (Fu) et le facteur de transcription Cubitus interruptus (Ci), qui réglemente l'activité transcriptionnelle de Ci. Tous ces composants subissent des modifications par phosphorylation au cours activation de la voie. Durant ma thèse, je me suis concentré sur l’étude de la phosphorylation de Cos2 et de Smo pour essayer de comprendre la signification de ces modifications et d’identifier les kinases impliquées dans ces processus. Nous avons développé des phospho-anticorps dirigés contre certains phospho-sites présents sur ces composants, et nous avons utilisé ces outils innovants pour des approches à la fois in vivo et in vitro. Nous avons obtenu deux phospho-anticorps dirigés contre deux serines différentes sur Cos2 (572-931), qui ont révélé que le gradient extracellulaire d’Hh est convertie en un gradient intracellulaire d'activité kinase Fu. En utilisant une approche similaire, nous avons étudié la régulation de la phosphorylation de Smo par la PKA, qui révélé que Fu et Cos2 sont nécessaires pour la phosphorylation de Smo par la PKA.

  • Titre traduit

    ˜The œHedgehog pathway : deciphering the importance of phosphorylation events for signal transduction


  • Résumé

    Hedgehog (Hh) is a secreted protein that controls cell growth and differentiation in both vertebrates and invertebrates. Cells that receive the Hh signal, activates a cascade of intracellular events characterized mainly by posttranslational modifications, such as phosphorylation, which are responsible to switch the active/inactive status of the pathway components. In Drosophila, the Hh signal transduction involves a cytoplasmic complex composed by the kinesin-like Costal2 (Cos2), the kinase Fused (Fu) and the transcription factor Cubitus interruptus (Ci), which function is to regulate the transcriptional activity of Ci. All these components undergo phosphorylation during pathway activation. During my Phd, I focused my studies on Cos2 and Smo phosphorylation trying to understand the meaning of these modifications and the kinases involved in these processes. In order to do that, we developed phospho-antibodies directed against specific phospho-sites present on these components, and we used these innovative tools for both in vivo and in vitro assays. We obtained two phospho-antibodies directed against two different serines on Cos2 (572-931), which had revealed different levels of its activation. We proposed that Hh extracellular gradient is converted into an intracellular gradient of Fu kinase activity, responsible for Cos2 phosphorylation. Using a similar approach we studied the regulation of Smo phosphorylation by PKA, which is essential for the transduction of the pathway. My results revealed that Fu and Cos2 are necessary for Smo PKA-dependent phosphorylation, suggesting that a stable complex PKA/Cos2/Fu/Smo is required for this process.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (175 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 163-175. Résumés en français et en anglais

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  • Bibliothèque : Université Nice Sophia Antipolis. Service commun de la documentation. Section Sciences.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : 10NICE4050
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