Etude de deux facteurs de transcription impliqués dans le développement des mélanomes et la formation de métastases : N Oct-3 et HIF-2alpha : caractérisation structurale, recherche de partenaires et étude de leur interprétation avec l'ADN

par Béatrice Cabos-Siguier

Thèse de doctorat en Biochimie structurale

Sous la direction de Eric Clottes.

Soutenue en 2009

à Toulouse 3 .


  • Résumé

    Les mélanomes sont les cancers de la peau les plus meurtriers. Les facteurs de transcription N Oct-3 et HIF (Hypoxia Inducible Factor) sont très souvent surexprimés dans les mélanomes. Ces protéines ou leurs domaines ont été surexprimés chez E. Coli et purifiés. La caractérisation structurale de N Oct-3 indique que le domaine DBD est riche en hélices alpha et que le domaine de transactivation (TAD) possède peu de structures secondaires répétitives : N Oct-3 semble être une protéine intrinsèquement désordonnée. Si le TAD n'influence pas l'affinité de liaison DBD/ADN; il module cette interaction en facilitant la phosphorylation du DBD par la PK A. Les facteurs HIF1alpha, 2alpha et 1beta ou leurs domaines ont été exprimés chez E. Coli. Ainsi les domaines bHLH (liaison à l'ADN) et PAS (dimérisation) de HIF-2alpha ont pu être purifiés et utilisés pour (i) obtenir des informations structurales, (ii) identifier des partenaires et (iii) étudier leur liaison à l'ADN, laissant présager l'existence d'un hétérodimère 1alpha/2alpha.

  • Titre traduit

    Study of two transcription factors involved in melanoma development and metastases formation : N Oct-3 et HIF-2alpha : structural characterization, partners and study of DNA binding


  • Résumé

    Melanoma is the most aggressive skin tumor. Transcription factors like N Oct-3 or HIF (hypoxia inducible factor) are often overexpressed in melanoma. In this study, N Oct-3 or HIF full-length proteins or their functional domains have been bacterially produced and purified. Structural characterization of N Oct-3 DNA binding domain (DBD) indicates a high alpha-helix content whereas N Oct-3 transactivation domain (TAD) is intrinsically unstructured. N Oct-3 TAD does not influence N Oct-3 DBD binding affinity towards its cognate DNA targets but can modulate N Oct-3 DBD interaction with DNA by enhancing PKA phosphorylation of the DBD. Full-length HIF1alpha, 2alpha and 1beta subunits or their functional domains were bacterially produced and purified. HIF2alpha DBD and PAS domains were purified to homogeneity and used to (i) obtain structural information, (ii) search for protein interacting partners and (iii) analyze their interaction with DNA. Our results support the existence of HIF1alpha/HIF2alpha heterodimer.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 1 vol. (148 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 138-148

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paul Sabatier. Bibliothèque universitaire de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2009TOU30111
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.