Synthèse d'un analogue d'anatoxine-A pour l'otention d'anticorps monoclonaux

par Mickaël Marc

Thèse de doctorat en Chimie organique

Sous la direction de Xavier Franck.

Soutenue en 2009

à l'Université de Rouen .


  • Résumé

    Les cyanobactéries sont des algues présentes sur des eaux stagnantes et qui peuvent produire des toxines et les rejeter à leur mort. On peut citer par exemple l'anatoxine-a et la saxitoxine. Afin de limiter les intoxications dûes à ces toxines, il est donc nécessaire de disposer d'un test rapide de détection et de quantification de celles-ci. Hormis les intoxications dues aux baignades ou à l'ingestion de ces eaux, un autre risque apparaît : l'utilisation de ces toxines à des fins terroristes. En effet, l'anatoxine est une neurotoxine très puissante, elle est également connu sous le nom de VFDF (Very Fast Death Factor), avec une DL50 de 0. 2-0. 5 mg/kg IP chez la souris. Il n'est pas possible pour le corps humain de créer des anticorps assez vite pour répondre à l'intoxication (trop rapide, molécules trop petites pour être reconnue. . . ). Le procédé de fabrication d'anticorps monoclonaux, développé au CEA de Saclay (SPI/LERI), utilisera un haptène formé par l'analogue de la molécule visée, accroché à une protéine porteuse (en général, la BSA). L'analogue envisagé est un amide à longue chaîne terminée par une fonction alcyne, permettant l'accrochage de la protéine par une cyclisation 1,3 dipolaire de Huisgen. L'étape clé de la synthèse de l'analogue d'anatoxine est la déracémisation de l'aminoacide de départ. La cristallisation d'un des deux composés nous a permis l'identification de chacun des deux diastéréomères. La synthèse se poursuit par une aminocyclisation assistée par le sélenium puis la synthèse a pu être achevée en un nombre limité d'étapes.

  • Titre traduit

    Synthesis of an analogue of anatoxine-a to produce monoclonal antibodies


  • Résumé

    Anatoxin-A is a highly toxic secondary amine alkaloid produced by cyanobacterias (blue green algae). Anatoxin's toxicity relies on its ability to bind nicotinic acetylcholine receptors (agonist) with a lethal dose LD50 of 0. 2-0. 5 mg/kg IP in mice, it is also designed as Very Fast Death Factor (VFDF). The presence of this toxin in fresh and drinking waters is responsible for water poisoning, thus creating a major threat on public health and making detection and quantification of Anatoxin-A in water a crucial issue. For such a purpose, monoclonal antibodies technology can be very useful for the development of a detection assay. The production of monoclonal antibodies able to bind to anatoxin requires the immunization of mice with an hapten composed of a carrier protein (usually BSA or KLH) and the toxin or a close analogue. We thus decided to undertake the synthesis of an anatoxin analogue that will be linked to a protein by click chemistry. The synthesis relies on the resolution of an aminoacid by derivatization with a chiral auxiliary (oxazolidin-2-thione). One diastereomer could be cristallised allowing us to determine the absolute configuration of the aminoacid moiety by X-ray diffraction. Thereafter, selenium-assisted aminocyclisation allowed us to form the bicyclic skeleton and the synthesis of the analogue could be straightfully completed in few steps.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (208 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 203-208. Notes bibliogr. [132] réf.

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  • Cote : 09/ROUE/S038
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