Etude des cytokines exprimées, après stimulation in vitro par amoxicilline, par des lymphocytes T humains sensibilisés

par Georges Khalil

Thèse de doctorat en Génomes et protéines

Sous la direction de Richard Maroun.

Soutenue en 2009

à Paris 7 .

  • Titre traduit

    Cytokine expression profile of sensitized human T lymphocytes following in vitro stimulation with amoxicillin


  • Pas de résumé disponible.


  • Résumé

    . Depuis que les firmes pharmaceutiques ont arrêté la production des déterminants pénicilliniques, l'utilisation des tests cutanés comme méthode de diagnostic est devenue moins standardisée. De plus, les tests cutanés peuvent parfois exposer le malade au risque d'une allergie sévère. Les tests de transformation lymphocytaire (TTL) pour le diagnostic d'une allergie aux pénicillines se basent sur l'utilisation des éléments radioactifs et présentent une sensibilité insuffisante. Le but de notre étude est d'établir une méthode de laboratoire fiable pour le diagnostic des allergies aux pénicillines et qui soit simple et sans danger pour le patient. L'étude a inclus 18 sujets allergiques à l'amoxicilline et 11 témoins. Suite à un prélèvement sanguin, les cellules mononucléaires périphériques sanguines (PBMC) sont isolées par la méthode Ficoll-Hypaque. Les cellules ainsi obtenues sont alors stimulées in vitro avec de l'amoxicilline libre à la concentration de Img/ml. La stimulation par la Phytohemaglutinnine A (PHA) est utilisée pour un contrôle ^positif. Les cytokines IL-2, IL-5 et IFN- y, sécrétées dans le surnageant des cultures lymphocytaires, sont dosées par la méthode ELISA. L'expression au niveau de la transcription des gènes de certaines cytokines (IL- 2, 4, 5, 13, TGF-J3, TNF- a et l'INF- y) est étudiée par RT-PCR. La technique ELISPOT est utilisée pour la détection de ITNF- y seulement. Pour toutes les techniques employées, l'étude des cytokines exprimées en réponse à la stimulation est faite aux 2eme et 5eme jours. À ce jour, notre étude contient le plus grand nombre de patients et de sujets contrôles, en comparaison avec d'autres études publiées qui ont utilisé la méthode ELISA pour le diagnostic de l'allergie à la pénicilline. La comparaison entre patients et témoins a porté sur les valeurs A qui représentent la différence des concentrations des cytokines après et avant stimulation par amoxicilline. Les tests statistiques t de Student et de Mann-Whitney Rank sont utilisés. Les méthodes RT-PCR et ELISPOT n'ont pas été concluantes. Par contre, l'étude par ELISA des différentes cytokines dans le surnageant des cultures lymphocytaires est la méthode la plus sensible et la plus spécifique (respectivement 80% et 100%). L'ensemble des résultats montre clairement que le dosage des cytokines par ELISA, après stimulation in vitro de lymphocytes humains sensibilisés, reste un excellent moyen diagnostic sans aucun danger pour le malade. Outre le fait que les kits ELISA sont disponibles sur le marché, cette méthode peut être réalisée dans de nombreux laboratoires sans avoir recours à un équipement très spécialisé.

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La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 1 vol. (145 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 93 Réf.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2009) 134
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