Caractérisation des domaines fonctionnels de la glycoprotéine VI plaquettaire à l'aide de variants recombinants et naturels

par Bénédicte Dumont

Thèse de doctorat en Biologie et pharmacologie de l'hémostase et des vaisseaux

Sous la direction de Martine Jandrot-Perrus.

Soutenue en 2009

à Paris 7 .


  • Résumé

    L'interaction plaquettes-collagène est un événement clé de l'hémostase et du maintien de l'intégrité vasculaire. La glycoprotéine (GP)VI est le principal récepteur d'activation des plaquettes par le collagène et constitue une cible pour développer de nouvelles molécules antithrombotiques. Ce travail a eu pour but de caractériser les relations entre la structure de GPVI et sa fonction. GPVI appartient à la superfamille des Immunoglobulines et présente d'importantes homologies avec le récepteur des IgA, FcαRI. Ces deux récepteurs sont exprimés sous forme d'un complexe non covalent avec FcRγ, sous-unité de signalisation. Afin de définir les rôles respectifs des deux domaines extracellulaires Ig-like (Dl et D2) de GPVI pour la liaison à ses ligands d'une part et de son domaine intracellulaire, caractérisé par la présence de motifs fonctionnels spécifiques, pour la transmission du signal d'activation d'autre part, nous avons construit des protéines chimériques dans lesquelles les différents domaines de GPVI ont été substitués par les domaines homologues de FcoRI ou de FcRy. Nous avons montré que les domaines Dl et D2 contribuent à la liaison au collagène, indépendamment l'un de l'autre, mécanisme inhabituel dans cette famille de récepteurs. L'absence des sites spécifiques intracellulaires de GPVI entraîne une moins bonne transmission du signal d'activation. Par ailleurs, nous avons décrit le premier cas de déficit congénital en GPVI. La patiente est hétérozygote pour deux mutations : une insertion de 5 nucléotides entraînant un déficit en GPVI de 50% et une substitution arginine/cystéine dans Dl provoquant une perte de fonction de la protéine.

  • Titre traduit

    Characterization of the functional domains of the platelet receptor glycoprotein VI with recombinant and natural variants


  • Résumé

    Recognition of exposed vascular subendothelial collagen by the platelet receptor glycoprotein (GP)VI is a critical early step for platelet activation and subsequent thrombus formation. GPVI is a member of the immunoglobulin receptor family and expressed bound to its signaling subunit, the Fc receptor γ-chain (FcRγ). The two immunoglobulin-like domains (Dl, D2) contain structural elements important for collagen binding and receptor dimerisation respectively, and several functional motifs have been specifically identified in the cytoplasmic domain of GPVI. GPVI presents high homologies with the IgA receptor, FcαRI. To identify the respective role of Dl, D2 in the binding to collagen and the role of the intracellular functional motifs in the signal transmission, we have reconstituted recombinant receptors of GPVI and FcoRI or FcRy. We have shown that both Dl and D2 contribute to the binding to collagen, independently, which is an unusual mechanism in this receptor family. The absence of the intracellular specific GPVI domains leads to the increase of the receptor sensitivity to the cleavage by metalloproteinase and to a less efficiency of the receptor in the transmission of the signal induced by agonists. We also describe for the first time two genetic abnormalities in one patient. This 10 year-old girl presented ecchymoses since infancy. GPVI DNA sequencing revealed (i) 9 R38C mutation in exon 3 of one allele (ii) an insertion of 5 nucleotides in exon 4 of the other allele, leading to a premature nonsense codon and absence of the corresponding mRNA.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (205 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 233 réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2009) 099
  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 8172
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