Modifications oxydatives des protéines au cours du vieillissement : mise en évidence et identification de cibles dans les lymphocytes humains circulants et caractérisation des effets du 4-hydroxy-nonénal sur l'Hsc70 in vitro

par Sylvie Poggioli

Thèse de doctorat en Structure, fonction et ingéniérie des protéines

Sous la direction de Bertrand Friguet.

Soutenue en 2009

à Paris 7 .

  • Titre traduit

    Protein oxidative modifications during ageing : detection and identification of protein targets in human peripheral blood lymphocytes and characterization of the effects of 4-hydroxy-nonenal on Hsc70 in vitro


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  • Résumé

    Le vieillissement est caractérisé par une altération des fonctions physiologiques dont la fonction immunitaire Aussi, nous avons étudié deux modifications oxydatives des protéines liées à l'âge, la glycation des protéines (AGE) et la conjugaison des protéines à des produits de peroxydation lipidique (4-HNE), dans les lymphocytes humains circulants (PBL). Les protéines provenant de donneurs jeunes et âgés ont été analysées par une approche protéomique. Après avoir été séparées par électrophorèse 2D, les protéines ont été détectées par Western Blot à l'aide d'anticorps anti-AGE ou anti-HNE. Ceci a permis de mettre en évidence 7 spots cibles de la glycation et 7 spots cibles du 4-HNE avec l'âge dans les PBL. Certains, identifiés par spectrométrie de masse, sont des protéines du cytosquelette, des protéines impliquées dans la signalisation cellulaire ou dans le contrôle qualité des protéines. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons étudié l'effet du 4-HNE in vitro sur Hsc70 (cible du 4-HNE ex vivo). Concernant la structure primaire de la protéine, après 16h d'incubation avec 100 μM de 4-HNE, 2 cystéines, 2 histidines et 4 lysines sont modifiées. Six de ces résidus ont été identifiés par spectrométrie de masse : ils sont situés au niveau des domaines portant l'activité ATPase ou responsable de l'oligomérisation de la protéine. Contrairement à l'activité ATPase qui est préservée, la capacité à fixer des protéines substrats et la propriété d'oligomérisation d'Hsc70 sont altérées. Enfin, l'Hsc70 modifiée par le 4-HNE n'est pas mieux dégradée que la protéine native par le protéasome 20S mais elle agit différemment sur la protéolyse de la caséine, substrat du protéasome.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (265 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : 573 réf.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • PEB soumis à condition
  • Cote : TS (2009) 093
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