Régulation de l'activité opioïde par les récepteurs du Neuropeptide FF : approches cellulaire et neurochimique

par Flavie Kersante

Thèse de doctorat en Pharmacologie

Sous la direction de Jean-Marie Zajac et de Catherine Mollereau-Manauté.

Soutenue en 2008

à Toulouse 3 .


  • Résumé

    Le neuropeptide FF est un peptide neuromodulateur du système opioïde. Chez le rongeur, il induit des effets pro- ou anti-opioïdes suivant la zone d'injection. Récemment deux récepteurs du NPFF ont été isolés chez différentes espèces, dont l'homme. Ces récepteurs, NPFF1 et NPFF2, appartiennent à la famille des RCPG. L'activation des récepteurs NPFF1 ou NPFF2 dans des neurones dissociés inhibe les effets des opioïdes sur les conductances calciques de type N. Dans le but d'identifier les mécanismes responsables de cette activité anti-opioïde, j'ai créé un modèle cellulaire d'expression des récepteurs NPFF1 dans le neuroblastome SH-SY5Y, qui exprime naturellement les récepteurs opioïdes et présente des caractéristiques neuronales, plus adapté aux études biochimiques que les neurones isolés. Dans la lignée recombinante, le NPVF (agoniste sélectif des récepteurs NPFF1) exerce une activité anti-opioïde sur l'inhibition des conductances calciques de type N induite par le DAMGO (agoniste des récepteurs µ-opioïdes, MOP) mais aussi sur une autre voie de signalisation induite par l'activation des récepteurs delta-opioïdes DOP (réactivation de la Phospholipase C\beta). Cette lignée représente donc un bon modèle d'étude des mécanismes moléculaires des effets anti-opioïdes. Comme il a été récemment montré que l'hétérodimérisation entre les récepteurs MOP et NPFF pouvait être la base des effets anti-opioïdes du NPFF. J'ai étudié si cette hétérodimérisation pouvait altérer le couplage des récepteurs MOP aux protéines G. Je me suis intéressée à la capacité du NPFF à moduler le couplage des récepteurs opioïdes aux protéines G par la technique de liaison du [35S]GTP\gamma\S. Sur cellules SH-SY5Y exprimant les récepteurs NPFF1 ou NPFF2, le NPFF ne modifie pas les paramètres d'activation des protéines G par les agonistes opioïdes. . .

  • Titre traduit

    Regulation of opioid activities by Neuropeptide FF receptors : cellular and neurochemical approaches


  • Résumé

    Neuropeptide FF is a neuromodulator of opioid system. In rodents, it displays pro- or anti-opioid activities depending on the injection sites. Recently, two NPFF receptors have been cloned in mammals and in human, NPFF1 and NPFF2 receptors belonging to the GPCR family. NPFF1 or NPFF2 receptors activation in rat dissociated neurons inhibits opioid induced regulation of N-type voltage gated calcium channels. In order to identify the mechanisms responsible for this cellular anti-opioid activity, I have constructed a cellular model of NPFF1 receptor expression in SH-SY5Y cells that naturally express opioid receptors and present neuronal characteristics, adapted to biochemical analysis. In NPFF1 expressing SH-SY5Y cells, NPVF (NPFF1 receptor agonist) displayed anti-opioid activity on DAMGO (MOP receptor agonist) induced inhibition of N-type voltage-gated calcium channels conductance but also on deltorphin-I (DOP receptor agonist) induced Phospholipase C\beta reactivation. Therefore, this cell line is a suitable model to investigate the interactions between NPFF and opioid receptors. As NPFF and MOP receptors have been recently found to heterodimerize in SH-SY5Y cells, I have investigated if this heterodimerization could impair opioid receptors coupling to G-protein, the modulation of MOP receptors coupling to G proteins by NPFF receptors activation was monitored by using the [35S]GTP\gamma\S binding assay. In SH-SY5Y cells that express NPFF1 or NPFF2 receptors, NPFF does not modify MOP receptors activation induced [35S]GTP\gamma\S binding. Furthermore, even if MOP and NPFF receptors share a G-protein common pool, they did not compete for this pool when receptors were not overexpressed. . .

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Informations

  • Détails : 1 vol. (178 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 142-178

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  • Bibliothèque : Université Paul Sabatier. Bibliothèque universitaire de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2008TOU30104
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