Modulation de l'expression de MYCN et de SNAP-25 au cours de la différenciation induite par le neuropeptide VIP dans des lignées de neuroblastome humain

par Lucie Chevrier

Thèse de doctorat en Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie

Sous la direction de Jean-Marc Muller et de Corinne Chadeneau.

Soutenue en 2008

à Poitiers .


  • Résumé

    Les neuroblastomes sont des tumeurs pédiatriques pouvant subir une régression spontanée ou une différenciation en leur homologue bénin. Le neuropeptide vasoactive intestinal peptide (VIP) est connu pour réguler la prolifération ou la différenciation de nombreuses cellules tumorales. In vitro, le VIP induit la différenciation de cellules de neuroblastome. Dans le travail décrit ici, les effets du VIP sur la modulation de l'expression de MYCN et de SNAP 25 (synaptosomal-associated protein of 25 kDa) ont été étudiés. Le gène MYCN code un facteur de transcription et est amplifié dans 22% des neuroblastomes. Cette amplification est associée à un mauvais pronostic. Les analyses par RT-PCR quantitative et par western-immunoblotting réalisées dans cette étude indiquent que le VIP diminue l'expression de MYCN, en particulier dans les cellules de neuroblastome humain IMR-32 présentant une amplification du gène MYCN. Cet effet du VIP a ensuite été comparé à celui de l'acide rétinoïque, molécule capable d'induire une différenciation associée à une diminution de l’expression de MYCN. L'acide rétinoïque est actuellement utilisé dans la thérapie des formes les plus graves de ces cancers. Le VIP et l'acide rétinoïque diminuent l'expression de MYCN de façon complémentaire dans le temps. Des co-traitements montrent que ces deux molécules agissent en synergie sur la régulation de l’expression de MYCN. SNAP-25 est une protéine SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein (SNAP) receptor) impliquée dans la fusion membranaire associée à divers processus dont l'élongation neuritique. Les résultats obtenus dans la lignée de neuroblastome humain SH-SY5Y indiquent que le VIP augmente l'expression de la protéine SNAP-25 ainsi que le taux d’ARNm des deux isoformes SNAP-25a et SNAP-25b. Les expériences d'interférence de l’ARN réalisées mettent en évidence l'implication de SNAP-25 dans la neuritogénèse induite par le VIP. Ces travaux sur la modulation par le VIP de l'expression de MYCN et de SNAP-25 permettent une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires de la différenciation induite par ce neuropeptide dans des cellules de neuroblastome humain. Ils suggèrent que le VIP, en favorisant une différenciation associée à une diminution de l'expression de MYCN, pourrait présenter un intérêt dans la thérapie des formes les plus graves de neuroblastomes.

  • Titre traduit

    Modulation of MYCN and SNAP-25 expression during VIP-induced differentiation in human neuroblastoma cell lines


  • Résumé

    Neuroblastomas are pediatric tumors which can undergo spontaneous regression or differentiation into a benign form. The neuropeptide vasoactive intestinal peptide (VIP) is known to control proliferation or differentiation of numerous tumoral cells. In vitro, VIP induces differentiation of neuroblastoma cells. In the present work, the effects of VIP on the modulation of MYCN and of SNAP-25 (synaptosomal-associated protein of 25 kDa) expression were studied. The MYCN gene encodes a transcription factor and is amplified in 22% of neuroblastomas. This amplification is associated with poor prognosis. The quantitative RT-PCR and western immunoblotting analyses performed in this study indicate that VIP decreases MYCN expression, especially in the human MYCN-amplified IMR-32 cell line. This effect of VIP was next compared to that of retinoic acid, a molecule able to induce differentiation in association with a decrease of MYCN expression. Retinoic acid is at present used in therapy for aggressive forms of neuroblastoma. VIP and retinoic acid decrease MYCN expression with complementary kinetics. Cotreatments indicate that these two molecules act in synergy to regulate MYCN expression. SNAP-25 is a SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein (SNAP) receptor) protein involved in membrane fusion that is associated with various processes such as neuritic elongation. The results obtained in the human neuroblastoma cell line SH-SY5Y indicate that VIP increases the expression of SNAP-25 protein as well as the level of both SNAP-25a and SNAP-25b mRNA isoforms. RNA interference experiments show that SNAP-25 is involved in VIP-induced neuritogenesis. These studies on the modulation of MYCN and SNAP-25 expression by VIP allow a better understanding of the molecular mechanisms of VIP-induced differentiation in human neuroblastoma cells. They suggest that VIP, which induces differentiation in association with a decrease of MYCN expression, might have a therapeutic potential for the treatment of aggressive forms of neuroblastoma.

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  • Détails : 1 vol. (225 f.)
  • Annexes : Bibliogr.454 réf.

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