Approches analytiques pour la quantification par spectrométrie de masse élémentaire et moléculaire du sélénium total, des acides aminés et métabolites séléniés dans les matériaux biologiques.

par Katarzyna Bierla

Thèse de doctorat en Chimie analytique et environnementale

Sous la direction de Ryszard Łobiński.

Soutenue en 2008

à Pau .


  • Résumé

    La thèse présente des solutions et des développements concernant l'analyse d'échantillons biologiques pour la détermination du sélénium total et de ses formes chimiques. Concernant la détermination du sélénium total, l'utilisation du xénon comme gaz de collision non réactif a été proposée pour éliminer les interférences polyatomiques pour la détection en ICP MS. Ceci a permis une détermination précise des rapports isotopiques du sélénium sans correction mathématique des interférences. Une méthode utilisant la dilution isotopique a été développée pour la détermination précise du sélénium dans le sérum sanguin. La partie principale de la thèse concerne le développement de méthodes pour la détermination quantitative des sélénométhionine et sélénocystéine dans le sang animal, les tissus mous et le lait. Les méthodes développées sont basées sur la carbamidométhylation quantitative de la sélénocystéine (SeCys) et de la sélénométhionine (SeMet) dans les protéines suivie par la protéolyse. La fraction contenant les deux acides aminés séléniés dérivatisés a été isolée par chromatographie d'exclusion stérique et analysée par HPLC en phase inverse avec appariement d'ions couplée à l'ICP MS. La limite de détection a été de 0. 02µg g-1 (matière sèche) pour chacun des deux acides aminés. Quant à la contribution à l'analyse en spéciation des plantes enrichies en sélénium, le travail propose le développement d'un schéma de l'extraction séquentielle permettant le recouvrement du sélénium de l'ail et une stratégie analytique générique pour l'identification de métabolites séléniés de faibles poids moléculaires sans étalon dans l'analyse d'un extrait aqueux de noix riches en sélénium.


  • Résumé

    The thesis presents methodological developments and solutions to several problems concerning the analysis of biological samples for the concentration of the total selenium and its species. As a contribution to the methodology for the total Se determination, the use of Xe as a non-reactive collision gas was proposed to eliminate the polyatomic interferences in Se detection by ICP MS. This allowed anaccurate determination of Se isotope ratios without mathematical correction. The principal part of the thesis concerns the development of methods for the quantitative determination of the Se-aminoacids (selenomethionine (SeMet), selenocysteine (Secys)) in animal blood, soft tissues and milk. The methods developed are based on the quantitative carbamidomethylation of SeCys and SeMet followed by their proteolytic release from proteins. The fraction isolated by size-exclusion chromatography was submitted to ion-paring HPLC - ICP MS analysis. In terms of contribution to speciation analysis of Se-rich plants, the work proposes a sequential extraction scheme allowing the recovery of Se from garlic. Se in Se-enriched garlic was fractionated by a sequential procedure including leaching with water, lysis, proteolysis, leaching with HCI, sulfite and CS and, finally, digestion of the residue. A strategy for the standardless identification of unknown water-soluble low-molecular weight Se metabolites by molecular mass spectrometry is pursued for monkeypot nuts. The use of size-exclusion, cation-exchange and ion-paring reversed-phase HPLC allowed the purification of selenocystathionine and its y-glutamyl-derivatives to a degree allowing their formal identification by organic mass spectrometry.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 1 vol. (151 p.)
  • Annexes : Bibliographie p.141-151

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université de Pau et des Pays de l'Adour. Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : US 464009
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.