Intérêt et limite de la fluorescence moléculaire dans le cadre du diagnostic biologique de la maladie de Fabry et de la détection supramoléculaire des lipides

par Eric Caudron

Thèse de doctorat en Pharmacie

Sous la direction de Patrice Prognon.

Soutenue en 2008

à Paris 11 .


  • Résumé

    La maladie de Fabry (MF) est une maladie génétique liée à l' X. Elle se caractérise par une accumulation de glycosphingolipides dans le lysosome à la suite d'une mutation du gène GLA codant pour l'α-galactosidase A. Ce travail est structuré autour de cette maladie et des problématiques liées à son diagnostic biologique, c'est à dire la mesure d'une activité enzymatique résiduelle et la détection des substrats lipidiques accumulés. Le lien entre ces deux aspects complémentaires est le développement d'un outil bio-analytique commun: la fluorescence moléculaire. La première partie est orientée vers l'optimisation de la mesure de l'activité enzymatique de l'α-galactosidase A avec un papier filtre comme support de prélèvement. Ces travaux aboutissent à la mise en place d'une technique de dépistage adaptée à des études cliniques de grande envergure, dont de profondes modifications analytiques par rapport à la technique de référence, sont à l'origine d'un gain de spécificité et donc de fiabilité diagnostic. La seconde partie est orientée vers le dosage potentiel des substrats d'accumulation par une nouvelle technique de détection des lipides par des sondes de fluorescence couplée à la chromatographie liquide. Cette partie fait l'objet de développements fondamentaux concernant l'optimisation chromatographique, puis une étude méchanistique des associations sondes-lipides est proposée, approche essentielle à la maîtrise de la détection des substrats de la MF. Il se dégage de ces réflexions analytiques, une proposition de prise en charge nouvelle de la maladie intégrant l'apport potentiel de nos travaux dans le dépistage, le diagnostic et le suivi thérapeutique des patients.

  • Titre traduit

    Interest and limit of the molecular fluorescence for biologic diagnosis of Fabry disease and supramolecular detection of lipids


  • Résumé

    Fabry's disease is an X-linked lysosmal storage disorder caused by abnormalities in the GLA gene, which leads to a deficiency in α-galactosidase A. The consequent abnormal accumulation of glycosphingolipids results in several clinical signs and symptoms. This work is structured around this disease and deals with biologic diagnosis. This diagnostic is based on the determination of a residual enzymatic activity and the detection of lipidic metabolic intermediates. The link between these two additional aspects is the development of a common bio-analytical technique: molecular fluorescence. The first part consists of the optimization of the α-galactosidase. A activity determination in dried blood spots on filter paper. This simple technique is needed to screen a large number of patients from populations at risk. The analytical modifications, with regard to the reference technique, are the origin of a better specificity and then a better reliability for the diagnosis. The second part consists of the potential determination of the accumulation of glycosphingolipids by a new post-column detection using fluorescence probe for lipid analysis in microbore liquid chromatography. This part covers fundamental developments concerning chromatographic optimization, and then a mechanistic study of probes - lipids associations is proposed. This is an essential approach to the mastery of the detection of Fabry disease accumulation metabolites. It emerges from these analytical reflections, a proposition of new coverage of the disease, integrating the potential contribution of our works into the screening, the diagnosis and the therapeutic monitoring of patients.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (261f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. p.233-247

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  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Châtenay-Malabry, Hauts-de-Seine). Service Commun de la Documentation. Section Pharmacie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 08PA114817 B
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